遺伝子相同組み換え中間体Holliday分岐切断機構の立体構造解析
基因同源重组中间体Holliday分支裂解机制的三维结构分析
基本信息
- 批准号:01J00507
- 负责人:
- 金额:$ 2.5万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
- 财政年份:2001
- 资助国家:日本
- 起止时间:2001 至 2003
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
今年度はホリデー分岐および複製フォークに作用する古細菌Hefの更なる立体構造解析を行った。まず、HefのN末端より三分の二を占めるヘリカーゼドメインの立体構造解析を行い、原子レベルで立体構造を決定した。Hefのヘリカーゼドメインは構造的に三つのドメインに分けることができ、このうちの二つのドメインはヘリカーゼに共通して見られるフォールドを有していた。これに対して、Hef特異的ドメインは他のヘリカーゼには見られないアルファーヘリックスのみからなるドメインであった。このドメインの機能を調べるため欠失変異体およびアミノ酸残基特異的置換変異体を作成し、ヘリカーゼ活性を測定した。その結果、このドメインはATP加水分解活性を保持していたものの、複製フォークを解消する機能が欠失していた。しかし、興味深いことに、ホリデー分岐の解消機能は有しており、二つのDNA基質間で異なる認識機構が存在していることがわかった。一方、C末端に位置するヘリックスヘアピンヘリックス(HhH)ドメインについても立体構造解析を行い、原子レベルで立体構造を決定した。このドメインは、昨年度の生化学的解析から予想されたように結晶中で二量体を形成していた。その相互作用は今までに知られている様式とは異なり、疎水性相互作用による強固な二量体を形成していた。HhHドメイン変異体を作成したところ、このドメインはヌクレアーゼ活性に必須であった。さらに、タンパク質-DNA相互作用を解析するためフットプリントを行ったところ、ヌクレアーゼドメインはフォーク構造の中心部を認識し、HhHドメインは二重鎖DNAを認識していることがわかった。以上の解析および昨年度までの解析から、ホリデー分岐を切断するHjcタンパク質の立体構造と機能、複製フォークを認識切断するHefの立体構造と機能が明らかになった。これらの結果より、ホリデー分岐や複製フォークがいかにして認識され切断されるかが解明された。
This year, the three dimensional structure analysis of archaea Hef was carried out by the differentiation and replication of bacteria. The N-terminal part of Hef is divided into three parts and two parts. The three-dimensional structure of Hef is analyzed and determined. Hef's three main components are connected to each other, and the two components are connected to each other. This is a very different story. The function of the enzyme is regulated, and the activity of the enzyme is measured. As a result, the ATP hydrolysis activity is maintained, and the replication function is lost. There is a difference between the two DNA substrates, and the cognitive mechanism exists. A side, C terminal position, C terminal position, C terminal position The analysis of the chemical and biological properties of these compounds is expected to lead to the formation of two molecules in the crystal. The interaction between the two substances is known as the interaction between the two substances. HH The interaction between DNA and DNA was analyzed. The central part of DNA structure was recognized. The double lock DNA was recognized. The above analysis is based on the analysis of the previous year, the separation of the three dimensional structure and function of the quality of the copy, and the recognition of the three dimensional structure and function of the Hef. The result of this is that we have to be careful.
项目成果
期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
T.Nishino, K.Komori, Y.Ishino, K.Morikawa: "X-Ray and Biochemical Anatomy of an Archaeal XPF/Rad1/Mus81 Family Nuclease : Similarity between Its Endonuclease Domain and Restriction Enzymes"Structure. 11. 445-457 (2003)
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Tatsuya Nishino, Kosuke Morikawa: "Structure and function of nucleases in DNA repair"Oncogene. 21. 9022-9032 (2002)
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- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Nishino, Komori, Ishino, Morikawa: "X-ray structural and biochemical anatomy of an archaeal XPF/Rad1/Mus81 family nuclease"Structure. (in press).
Nishino、Komori、Ishino、Morikawa:“古细菌 XPF/Rad1/Mus81 家族核酸酶的 X 射线结构和生化解剖学”结构。
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- 通讯作者:
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