ジカルボニル化合物による抗酸化酵素の不活性化

二羰基化合物使抗氧化酶失活

• 批准号: 01J00986
• 负责人: 朴 用軾
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J00986/
• 关键词: ジカルボニル化合物; チオレドキシンレダクターゼ; グルタチオンペルオキシダーゼ; 質量分析(TOF-MASS)

^*ジカルボニル化合物による抗酸化酵素の不活性化の確認と結合部位の同定グルタチオンペルオキシダーゼは細胞内の過酸化水素ならびに過酸化脂質除去の中心的な酵素であるが、すでに予備実験においてジカルボニル化合物やグルコース、フルクトースによって不活性化されるという結果を得ていた。まずメチルオキサールならびに3-デオキシグルコソンによる不活性化の濃度依存性を検討した結果メチルオキサールや3-デオキシグルコソンはグルタチオンペルオキシダーゼ活性を濃度依存的に阻害した。さらにその阻害は不可逆的ことが認められた。阻害のメカニズムを明らかにするため、不活性化されたグルタチオンペルオキシダーゼをエンドペプチダーゼで処理しRP-HPLCで分離し、質量分析(TOF-MASS)ならびにプロテインシクエンサーを用いてジカルボニル化合物の結合部位を同定し、不活性化メカニズムを明らかにした。この結果は現在英文誌に投稿中である。またチオレドキシン系もグルタチオン系と並行して細胞内過酸化物除去に重要な役割を果たしているが、その中でチオレドキシンレダクターゼがジカルボニル化合物で不活性化される可能性があることが予備実験で予想されていた。そこでヒト胎盤より本酵素を精製し、ジカルボニル化合物によりチオレドキシンレダクターゼ活性が阻害されるか否かを検討した。その結果メチルオキサールによってチオレドキシンレダクターゼ活性が濃度依存的に阻害された。現在はその不活性化メカニズムを明らかにするため質量分析(TOF-MASS)ならびにプロテインシクエンサーを利用してジカルボニル化合物の結合部位を同定した。この結果は現在英文誌に準備中である。

^"Identification of the inactivation of anti-acidification enzymes and identification of binding sites in the preparation of anti-acidification enzymes in cells and lipid removal centers." The concentration dependence of inactivation in the 3-D solution was investigated. The concentration dependence of inactivation in the 3-D solution was investigated. The damage is irreversible. The binding sites of the compounds were identified and inactivated by RP-HPLC for separation and mass analysis (TOF-MASS). The result is now in English. The possibility of inactivation of intracellular peracid compounds is expected to occur in parallel with the removal of intracellular peracid compounds. The enzyme is purified and purified by the enzyme inhibitor. As a result, the concentration of the enzyme is dependent on the activity of the enzyme. The present invention relates to a method for determining the binding site of an active compound by mass analysis (TOF-MASS). The result is now in English.

项目成果

Y.S.Park: ""Inactivation of human thioredoxin reductase by acrolein" in "The Proceeding of the 7th International Symposium on the Maillard Reaction""International congress series. 352 (2002)

Y.S.Park：““丙烯醛对人硫氧还蛋白还原酶的灭活”，《第七届美拉德反应国际研讨会论文集》”国际会议系列。

Y.S.Park: "Identification of the binding site of methylglyoxal on gutathione peroxidase, methylglyoxal inhibites glutathione peroxidase activity via binding to glutathione binding sites Arg 184 amf Arg 185"Free Radical Research. (in press). (2002)

Y.S.Park：“甲基乙二醛在谷胱甘肽过氧化物酶上的结合位点的鉴定，甲基乙二醛通过与谷胱甘肽结合位点 Arg 184 amf Arg 185 结合来抑制谷胱甘肽过氧化物酶活性”自由基研究。