低ホスファターゼ症における組織非特異型アルカリホスファターゼの細胞生物学的解析

低磷酸酯酶症组织非特异性碱性磷酸酶的细胞生物学分析

• 批准号: 01J07085
• 负责人: 入江 真理子
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Japan Women's University (2003)The University of Tokyo (2002)Niigata University (2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J07085/
• 关键词: 低アルカリホスファターゼ症; 組織非特異型アルカリホスファターゼ; 複合ヘテロ接合体; 細胞内輸送; 酵素活性; 低ホスファターゼ症; アルカリホスファターゼ; 分子シャペロン; Bip; GRP78

申請者は、これまでに骨格形成不全、病的骨折、乳歯や永久歯の早期脱落を特徴とする低アルカリホスファターゼ症の細胞分子生物学的メカニズム解明のため、従来報告されていた本酵素の遺伝子の突然変異に着目し、この変異が酵素活性の消失と細胞内輸送の異常をもたらすことにより、低アルカリホスファターゼ症が生じることを明らかにしてきた。次の段階として、最近新たに見い出された組織非特異型アルカリホスファターゼの別の変異について、それを引き起こすメカニズムの解明を目的とし実験を行った。今回、低アルカリホスファターゼ症で報告された組織非特異型アルカリホスファターゼの複合ヘテロ接合体(F310L,V365I)症例について解析を行った。野生型および変異型組織非特異型アルカリホスファターゼ遺伝子をCOS細胞に導入し、各々の細胞内局在について共焦点レーザー顕微鏡を用いて解析を行ったところ、いずれも細胞膜表面に発現していることが判った。さらに、P-nitrophenyl phosphateを基質としたassayによりアルカリホスファターゼ活性について検討したところ、野生型の酵素活性を100%とすると、F310Lは67%、V365Iは31%であった。アゾ色素法にて、形態的およびSDS-PAGEにて解析した結果、P-nitrophenyl phosphateを基質としたassayの結果に一致していた。以上の結果から、複合ヘテロ接合体(F310L,V365I)症例は、細胞内輸送に異常をきたさず、酵素活性が低下することにより、臨床的に重篤な低アルカリホスファターゼ症を引き起こすことが判明した。

Applicant's condition: incomplete bone formation, diseased fractures, premature breast loss, permanent nipple loss, special features The explanation of the cell molecular biology of hypoglycaemic syndrome and the explanation of the disease are reported by Hayashi Sudden changes in the original enzyme, loss of enzyme activity, and abnormalities in intracellular transportをもたらすことにより、low アルカリホスファターゼ syndrome が生じることを明らかにしてきた. The next step is the stage, and the latest one is the new one. The organization is a non-specific type.比の変differentについて、それをinducingき起こすメカニズムの解明をpurposeとし実験を行った. This time, we report on the disease of hypoglycemia: tissue non-specific type of hypoglycemia.ーゼの composite ヘテロ joint (F310L, V365I) case analysis についてを行った. Wild-type および変 heterogeneous tissue non-specific アルカリホスファターゼ弝子をCOS cells are introduced into each 々のcell.ついて Confocal レーザー顕microscope is used to analyze を rows and ったところ, and いずれもcell membrane surface に発appears していることが った.さらに、P-nitrophenyl Phosphate base material and assay material The wild-type enzyme activity is 100%, F310L is 67%, and V365I is 31% active. The results of アゾ pigment method and morphological SDS-PAGE analysis are consistent, and the results of P-nitrophenyl phosphate matrix and assay are consistent. The above results are as follows: Cases of composite conjugated conjugates (F310L, V365I), Abnormalities in intracellular transport, and enzymes It is clear that the low activity of steroids and the clinical symptoms of low glucocorticoid activity are caused by the disease.