幹細胞移植と遺伝子導入によって脊椎動物の四肢を再生させる手法の確立

建立通过干细胞移植和基因转移再生脊椎动物肢体的方法

• 批准号: 01J07866
• 负责人: 横山 仁
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J07866/
• 关键词: ツメガエル; 四肢; 肢芽; 再生; FGF-10; Wnt遺伝子; Wnt遺伝子群

四肢再生過程におけるWnt遺伝子の機能を明らかにするために、ツメガエルの四肢再生過程におけるWnt遺伝子の発現量をRT-PCR法によって解析したところ、四肢の形成過程に関わることが示唆されているWnt遺伝子のうちで特にWnt-3aの発現が切断後の早い時期(3日以内)に活性化されることを明らかにした。さらにWnt-3aの発現をin situハイブリダイゼーション法で解析したところ、肢芽先端部領域での発現を確認した。そしてWnt-3aによって引き起こされるとされるWnt/canonical経路を担っているTcf-3およびLef-1の発現も同時に解析したところ、Wnt-3aとよく似た発現パターンを示す事を明らかにした。またWnt-3aのタンパクを染み込ませたビーズを、変態が進行して再生能を失ったツメガエルの四肢の切断面に移植すると、FGF-10タンパクを作用させた場合と同様に本来ならば発現しないfgf-8の発現を誘導しうることを明らかにした。またWnt/canonical経路のシグナリングの活性化を検出するレポーター遺伝子を組み込んだトランスジェニックガエルを作成し、レポーターの活性を解析したところ、原腸胚および尾芽胚の時期において背側正中領域において強い活性が検出される事を確認した。この胚を肢芽が形成される発生段階まで育てた後に、再生能を有する発生段階で肢芽を切断したところ、形成された再生芽の先端部領域において、レポーター遺伝子の活性が見られることを発見した。

The function of Wnt gene in limb regeneration process was analyzed by RT-PCR method, and the activity of Wnt gene in limb regeneration process was analyzed by RT-PCR method. The activity of Wnt gene in limb regeneration process was activated in the early stage (within 3 days) after Wnt-3a was cut off. The discovery of Wnt-3a in situ was confirmed by the analysis of Wnt-3a in situ. Wnt-3a and Lef-1 appear at the same time as Wnt-3a. Wnt-3a and FGF-10 can be used in the same way as Wnt-3a and FGF-10 can be used in the same way as Wnt-3a. Wnt/canonical circuit of the system of activity detection, the formation of the sub-group, the analysis of the activity of the sub-group, gastrula, tail bud embryo stage and the middle of the dorsal center of the field, the identification of the activity detection. The embryonic bud formation stage is followed by the regeneration stage. The embryonic bud formation stage is followed by the regeneration stage. The regeneration stage is followed by the regeneration stage.

项目成果

横山 仁: "井出宏之編 四肢の形成機構 第12章 四肢の再生II 再生におけるパターン形成"(株)アイピーシー. 27 (2003)

Hitoshi Yokoyama：“Hiroyuki Ide ed.肢体形成机制第12章肢体再生II再生中的模式形成”IPC Corporation 27（2003）。

Hitoshi Yokoyama: "Anteroposterior axis formation in Xenopus limb bud recombinants : A model of pattern formation during limb regeneration"Developmental Dynamics. 225. 277-288 (2002)

Hitoshi Yokoyama：“非洲爪蟾肢芽重组体的前后轴形成：肢体再生过程中模式形成的模型”发育动力学。