RNA helicase Aの転写活性化最小領域に結合する因子の同定と機能解析

RNA解旋酶A最小转录激活区结合因子的鉴定和功能分析

• 批准号: 01J09562
• 负责人: 荒谷 聡子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J09562/
• 关键词: RNA helicase A; 転写; 転写活性化ドメイン; 疎水性アミノ酸; トリプトファン; MLE

転写コアクチベーターCREB binding protein(CBP)/RNA Helicase A(RHA)複合体は様々な転写因子と結合し転写統合装置として多くの生命現象に関与していることが示されている。申請者はRHAの転写活性化最小領域領域(MTAD)を50アミノ酸に決定し同領域を介してPol IIと複合体を形成すること、その結合および転写活性化にはトリプトファン残基が重要であることを見いだした。また同領域は種を越えて保存された重要な機能をもつドメインであると考えられ、その解析は様々な因子の転写活性化機構の解明にもつながる可能性がある。そこで本研究ではMTADを介した転写活性化メカニズムの解析を目的とした。1.トリプトファン残基の作用機構の解析MTADと結合因子の相互作用および転写活性化におけるトリプトファンの作用機構を明らかにするため、MTAD内のトリプトファンを疎水性のロイシン、ベンゼン環をもつフェニルアラニンにそれぞれ置換した変異体を作製し転写活性化能への影響を検討した。トリプトファンをアラニン、ロイシンに置換した変異体は転写活性化能が低下していたが、フェニルアラニンに置換した変異体では影響が見られなかった。またフェニルアラニンに置換した変異体のみがPol II結合能を有していた。これらのことからMTADを介したPol IIのリクルートおよび転写活性化にはトリプトファン残基のベンゼン環が重要であることが示唆された。2.MTADの個体レベルでの機能解析MTADの機能を個体レベルで検証するため、RHAのショウジョウバエのホモログであるMLEのMTADを欠失した変異体のTransgenic flyを作製した。MLEは雄の生存に必須であるためnull mutantではホモの雄は致死である。Transgenic flyを用いて雄の生存能に対するMTAD機能を検討していく。

CREB binding protein(CBP)/RNA Helicase A(RHA) complex is a complex of binding factors and synthesis devices related to multiple life phenomena. The applicant shall write the minimum domain of activity (MTAB) of RHA, determine the acid content of the same domain, and form a Pol II complex. In the same field, the important function of the seed is preserved, and the possibility of explaining the activation mechanism of the factor is high. The purpose of this study is to analyze MTAB activity. 1. Analysis of the mechanism of action of MTAB and binding factors and the mechanism of action of MTAB and binding factors. The activity of the enzyme is reduced by the substitution of the enzyme. The Pol II binding energy of the Pol II can be obtained by substitution. This is the first time that MTAD has been activated. 2. Function analysis of MTAB's individual function. The function of MTAB's individual function is verified by RHA. The function of MTAB's individual function is verified by RHA. The function of MTAB's individual function is verified by RHA. MLE male must survive null mutant male to die Transgenic fly can be used to detect MTAB functions.

项目成果

Hidetoshi Fujita: "Antithetic effects of MBD2a on gene expression"Molecular and Cellular Bioloby. (in press). (2003)

Hidetoshi Fujita：“MBD2a 对基因表达的反作用”分子和细胞生物学。

Satoko Aratani: "Aromatic residues are required for RNA helicase A mediated transactivation"International Journal of Molecular Medicine. (in press). (2003)

Satoko Aratani：“RNA 解旋酶 A 介导的反式激活需要芳香族残基”国际分子医学杂志。