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Evx2遺伝子の機能及びその高次発現調節機構解析

Evx2基因功能及其高阶表达调控机制分析

基本信息

批准号：
13045058
负责人：
近藤隆
金额：
$ 1.98万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13045058/
关键词：
マウス染色体転写調節発生 Evx2遺伝子 HoxD遺伝子群 ES細胞

项目摘要

Evx2遺伝子は2番染色体上にあるHoxDコンプレックスから8Kbの近傍に連鎖するホメオボックス遺伝子である。これまでin situハイブリダイゼーション或はレポーターアリルを使用し、その発現を明らかにしてきた。その発現は胎児期において、大きく二つの特徴に分類が可能である。その初期発現においては胎生9日目にHoxDコンプレックスにおけるtemporal colinearity(時間的共線性)に従い、Hoxd13とほぼ同時期に、体軸後方で発現を開始する。その後、他のHoxD遺伝子群と異なり、胎生10日に中枢神経系、特に小脳原基において強い発現を開始する。そこで、そのEvx2遺伝子の発生、殊に脳形成における役割を検証する為、ES細胞を用い、現在ノックアウトマウスの作成を行っている。ここでは大腸菌由来のβ-ガラクトシダーゼの遺伝子をEvx2の開始コドンからin-frameに挿入したもの、及びβ-ガラクトシダーゼをもたないものの両方を作成している。現在両変異ともキメラの作出に及んでおり、germ lineへの貢献を確認し、F1プロジェニーが得られている。また、Evx2の中枢神経系、脳における発現を促進するエンハンサーはEvx2の3'側の遠位に存在すると考えられており、発現プロファイルの検討から、そのエンハンサーのHoxd13プロモーターへの作用をブロックする活性が二つの遺伝子間8KbのDNA領域にコードされていることが可能性として考えられた。そこで、その活性領域をより詳細に検討するため、ターゲッティドトランスジーンの手法を用い、活性DNAをEvx2遺伝子の下流に挿入する実験を行った。現在までに、4種類の重複した断片を挿入したES細胞、及びマウスを作出してきた。これらの結果により、当該活性が、1.5Kbの範囲に存在することを示すことができた。

The Evx2 gene is located on chromosome 2 and is closely linked to the HoxD This is the first time in a long time that I've seen you. It is possible to classify the characteristics of the two types of development. The initial appearance of HoxD occurs on the 9th day of birth, HoxD occurs on the 9th day of birth. After birth, other HoxD gene groups differ, and on the 10th day of birth, the central nervous system and the special small primordium begin to emerge. The development and production of the Evx2 gene in human ES cells and ES cells The origin of E. coli and the origin of E. coli are discussed in detail below. Now, we can confirm the contribution of the Germ Line and F1 to the project. Evx2 's central nervous system, the presence of the virus, the presence of the virus, the For example, if you want to use Evx2 gene, you can use Evx2 gene. Now, four kinds of repetitive fragments are introduced into ES cells, and they are made into cells. The results show that when the activity is 1.5Kb, the range of activity is 1.5Kb.