線虫糖鎖の系統的グリコーム解析とガレクチンファミリーの内在性リガンド

线虫糖链和半乳糖凝集素家族内源配体的系统糖组分析

基本信息

批准号：
13202058
负责人：
平林淳
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

当該申請者は糖鎖が核酸・タンパク質に次ぐ「第三の生命情報高分子」であることを主張してきた。この事を客観的に議論すべく糖鎖の基盤データづくりは糖鎖研究者の責務であるが、その実現には基本ストラテジーの確立が不可欠である。当該申請者らは「Glyco-catch法」というアフィニティー技術を編みだし、C.elegans糖タンパク質を標的としたグリコームプロジェクトを開始した(Proteomics,2001)。C.elegansの可溶性画分から分泌型糖タンパク質を標的とし高マンノース型糖鎖をもつ糖タンパク質と複合型糖鎖をもつ糖タンパク質をそれぞれを識別するレクチンを用いて捕獲し、それぞれに対応する32、及び16遺伝子を特定した。これら2グループの遺伝子は1つの例外を除き全く重複を示さなかったので、糖鎖のタイプは各遺伝子についてすでに定められている、という生物学的に興味深い結果が得られた(投稿準備中)。さらに、膜画分の解析を進める一方、より複雑な生物であるマウスの各種臓器を標的としたグライコキャッチ法を実施し、すでに実績を挙げている(ABRF2002、発表予定)。一方、糖鎖自身の構造解析はグライコーム研究の一端をになう重要分野であるが、当該研究者は潜在的に単独で複雑な糖鎖に対しても解析能力を有する三つの手法として、質量分析法、2-Dマップ法、強化フロンタルアフィニティークロマトグラフィー(FAC)を根幹技術として選定した(J.Chromatogr.B,2002)。このうち、強化FACは当該研究者ら自身により開発された方法で(J.Chromatogr.A,2000)、レクチン-糖鎖間の親和定数(Ka)を迅速、高感度で精度高く決定できる。以上の三手法はそれぞれ全く異なる原理に基づいていることから、これらの組み合わせによる構造決定は高い信頼性が期待できる。将来的には上記グライコキャッチ法を組み合わせた糖鎖の種差、個体差、臓器差等の精密分析を視野に入れた「比較グライコーム」解析への道を模索したい。

申请人认为，糖链只是仅次于核酸和蛋白质的“第三寿命信息聚合物”。糖连锁研究人员有责任创建有关糖链的基本数据以客观地讨论这一点，但是建立基本策略以实现这一目标是至关重要的。申请人开发了一种称为“ Glyco-Catch方法”的亲和力技术，并启动了针对秀丽隐杆线虫糖蛋白的Glycome项目（Proteeomics，2001）。使用凝集素捕获了来自秀丽隐杆线虫可溶性分类糖蛋白的凝集素，使用凝集素捕获，该凝集素区分具有高甘露糖型聚糖和复杂聚糖的糖蛋白，并鉴定出了与每个相对应的32个和16个基因。由于这两组基因在一个例外没有重叠的情况下没有重叠，因此我们获得了一个有趣的生物学结果，即已经为每个基因定义了聚糖的类型（用于发布）。此外，在分析膜分数的同时，我们已经通过实施针对各种小鼠器官的糖匹配方法来取得成功，这是一种更复杂的生物体（ABRF2002计划宣布）。另一方面，聚糖本身的结构分析是一个重要领域，它是Glycombs研究的一部分，研究人员选择了质谱，2-D MAP方法和增强额叶亲和力色谱（FAC）的基本技术，作为三种方法，可以单独分析复杂的Glycans（J. Chromatogr）。其中，增强的FAC可以由研究人员本身（J.Chromatogr。A，2000）开发的方法快速，高度敏感地确定，以确定凝集素和糖链之间的亲和力常数（KA），其精度很高。由于以上三种方法基于完全不同的原理，因此可以预期，通过结合这些结构可以实现高可靠性。将来，我想探索“比较糖孔”分析的途径，该途径涉及对物种，个体差异，器官差异等的精确分析，以及与上述糖果方法的结合。