末梢血中遊離DNAのエピジエネティクスを標的とした癌分子診断

针对外周血游离DNA表观遗传学的癌症分子诊断

• 批准号: 13218051
• 负责人: 川上 和之
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218051/
• 关键词: DNAメチル化; エピジェネティクス; 分子診断; 血液検査

坦癌患者において末梢血に遊離して存在する癌由来DNAのエピジェネティクな変化、すなわちhypermethylation(HM)を検出し、癌の早期診断に利用可能かを検討した。1.PCRにて177塩基対のβアクチン遺伝子断片を作成し、これを牛血清に混入させ各種抽出法にてDNAを抽出した。また、豚末梢血管より上記のDNA断片を注入し各種採血管にて末梢血を採取した。抽出効率、再現性などより、血清採取、A祉キットによるDNA抽出を解析条件として選択した。2、p16,APC遺伝子をターゲットとして、進行大腸癌患者血清20検体を解析した。1例のみで、APC遺伝子のHMを末梢血から検出可能であった。癌原発巣を解析するとP16では3例(15%)、APCでは5例(25%)にHMを認めた。原発巣におけるHMの低頻度が末梢血での低検出頻度の1因と考えられた。3、より高頻度にHMが認められる標的遺伝子検索を進める目的で、大腸癌54例を対象としてp16、APCに加え、hMLH1、ESR1、CALCA、HIC1、MGMT、TIMP3、MYOD1を解析した。p16、APC、hMLH1、TIMP3のHMは癌特異的であったがその頻度は比較的低頻度であった。ESR1、CALCA、HIC1、MGMTでは高頻度のHMを認めたが、癌特異的ではなかった。一方、MYOD1のみが癌組織におけるHMが77.8%と高頻度かつ、正常組織におけるHMが5.6%と比較的癌特異的であった。4、MYOD1をターゲットとし、上記の解析で対象とした大腸癌54例から採取した末梢血を解析した。原発巣においてHMが認められた42例中26例(62%)で末梢血においてもMYOD1のHMが検出可能であった。54例のすべての解析例を含めると末梢血により癌の存在診断が可能と考えられる頻度は48%(54例中26例)であった。

The presence of free DNA in the peripheral blood of patients with cancer may be used to detect and diagnose cancer early. 1. PCR was used to create the β-DNA fragment of the 177-bp gene, and the DNA was extracted by mixing bovine serum with various methods. DNA fragments were injected into the peripheral blood vessels of pigs and collected from peripheral blood vessels of pigs. Extraction rate, reproducibility, serum sampling, DNA extraction and analysis conditions 2, p16,APC gene analysis, colorectal cancer patients serum 20 body analysis 1 case, APC, HM, peripheral blood, possible. 3 cases (15%) were diagnosed as P16 and 5 cases (25%) as HM. The low frequency of the original detection of HM and the low frequency of the peripheral blood detection of HM are due to the following reasons: 3. High frequency of HM, identification of target genes, target genes, colorectal cancer 54 cases, analysis of p16, APC, hMLH1, ESR1, CALCA, HIC1, MGMT, TIMP3, MYOD1. p16, APC, hMLH1, TIMP3 and HM are cancer-specific. ESR1, CALCA, HIC1, MGMT high frequency HM, cancer specific One side, MYOD1 and cancer tissue HM 77.8% high frequency HM 5.6% normal tissue HM compared to cancer specific HM 4. MYOD1: Analysis of Colorectal Cancer 26 cases (62%) of 42 cases were found to have the possibility of detecting HM in peripheral blood. 54 cases were diagnosed as having cancer in peripheral blood, and the frequency of diagnosis was 48%(26 cases out of 54).

项目成果

Kawakami, K. et al.: "Different Lengths of a Polymorphic Repeat Sequence in the Thymidylate Synthase Gene Affect Translational Efficiency but Not Its Gene Expression"Clinical Cancer Research. 7・12. 4096-4101 (2001)

Kawakami, K. 等人：“胸苷酸合成酶基因中多态性重复序列的不同长度影响翻译效率，但不影响其基因表达”临床癌症研究 7・12 (2001)。