免疫調節遺伝子とのフュージョンDNAワクチンによる細胞内寄生原虫感染制御の新戦略

使用具有免疫调节基因的融合DNA疫苗控制细胞内原虫感染的新策略

• 批准号: 13226094
• 负责人: 姫野 国祐
• 金额: --
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226094/
• 关键词: DNAワクチン; 感染制御; 遺伝子治療; 細胞内寄生原虫; 融合ワクチンベクター; トキソプラズマ; マラリア; リーシュマニア

「今年度の成果」(I)トキソプラズマに対するDNAワクチン法の確立我々のこれまでの研究により、トキソプラズマ強毒株(RH株)に対する感染防御とはCD4^+TとCD8^+Tの両者が必要であることが解明されている。そこでワクチン候補遺伝子としてトキソプラズマ由来のSAG1遺伝子を用いclass II拘束性のCD4^+Tを誘導するためにpJW4304-SAG1とのフュージョンDNAを構築した。さらに、class I拘束性のCD8^+Tを誘導するためにユビキチン遺伝子とSAG1遺伝子のフュージョンDNAを作製した。これらの遺伝子をBALB/cマウスに2週間ごとに4回遺伝子銃を用いてDNAワクチン後、RH株を感染した。ユビキチン化SAG1を用いた場合、顕著なワクチン効果が誘導され、キラーT細胞活性も強かったがIFN-γ産生能はそれ程強くなかった。一方、pJW4304-SAG1遺伝子でDNAワクチンした場合には、ワクチン効果は強くなかったがIFN-γ産生能は強かった。現在さらにワクチン効果を高めるために、両遺伝子のコンビネーションおよびIL-12等のサイトカイン遺伝子とのコンビネーションにより、より効果的なワクチン効果誘導法を研究している。(II)マラリアに対するDNAワクチン法の確立マウスマラリア原虫であるP.yoeliiを用いた感染系を用いて、P.yoelii由来のMSP1遺伝子を用いてDNAワクチンを行った。この原虫感染に対してはMSP1遺伝子とIL-12遺伝子のコンビネーションDNAワクチン法が最も効果的で強い防御免疫を誘導した。この原虫に対してはユビキチン遺伝子等とのフュージョンDNAはそれ程効果的ではなかった。このため、MSP1の改造およびMSP3遺伝子の新しい遺伝子の構築を進めている。またIL-12遺伝子単独でもワクチン効果は得られなかった。今後さらに抗原遺伝子およびDNAワクチン法を確立していく。(III)クルーズトリパノソーマ、リーシュマニアに対するDNAワクチン法の確立この両者の原虫に対しては治療的にはIL-12遺伝子治療のみで著効を示すことを見出した。現在、クルーズトリパノソーマ由来のTSA遺伝子、リーシュマニア由来のLACK遺伝子を用いたDNAワクチン法の開発に着手している。[今後の方針]細胞内寄生性原虫のエスケープ機構の相異に対応したDNAワクチン法の確立が我々の大きな課題であり、またこのような法則性の確立はワクチン開発のうえで急務である。

"This year's results"(I), the establishment of a DNA protocol for the study of anti-CD4 ^+T and CD8^+T virus infection defense, and the need to clarify this issue. The candidate DNA was constructed from SAG1 DNA using class II binding CD4^+T. The CD8 +T binding gene of class I was induced by DNA from the SAG1 gene. 2 weeks later, the virus was detected in 4 cells. In the case of SAG1, the activity of T cells is enhanced by IFN-γ production. The pJW4304-SAG1 gene is a strong promoter of IFN-γ. Now, we are studying the method of inducing the effect of the virus by using IL-12 as the catalyst. (II)P. yoelii infection system established by DNA sequencing The most effective way to prevent infection is to use MSP-1 and IL-12 genes. This is the first time I've ever seen a woman who's been to a hospital. MSP1 and MSP3 are the new generation of MSP. The IL-12 gene was isolated from the virus. In the future, antigen and DNA will be established. (III)The results of the study showed that the infection rate of IL-12 was significantly higher than that of the control group. Now, the development of the TSA gene, the LACK gene and the DNA gene are under way. [Future Policy] Establishment of Different Mechanisms for Intracellular Parasitic Protozoa by DNA Method

项目成果

Kawazu, S., Himeno, K.et al.: "Molecular characterization of a 2-Cys peroxiredoxin from the human malaria parasite Plasmodium falciparum"Molecular & Biochemical Parasitology. 116. 73-79 (2001)

Kawazu, S., Himeno, K.等人：“来自人类疟疾寄生虫恶性疟原虫的 2-Cys 过氧化还原蛋白的分子特征”分子

Nakano, Y., Himeno, K.et al.: "Immunization with live Beverly strain of Tosoplasma gondii enhances CD8^+T cell-mediated killing of highly virulent RH strain"Immunology. (in press). (2001)

Nakano, Y., Himeno, K.等人：“用弓形虫贝弗利活菌株进行免疫可增强 CD8+ T 细胞介导的高毒力 RH 菌株的杀伤”免疫学。

Zhang, M., Himeno, K.et al.: "CD4^+ T cells are required for HSP65 expression in host macrophages and for protection of mice infected with Plasmodium yoelii"Parasitology International. 50・3. 201-209 (2001)

张，M.，Himeno，K. 等人：“宿主巨噬细胞中 HSP65 表达和保护感染约氏疟原虫的小鼠需要 CD4^+ T 细胞”Parasitology International 201-209 (2001)。

Nishitani, M., Himeno, K.et al.: "A convenient cancer vaccine therapy with in vivo transfer of interleukin 12 expression plasmid using gene gun technology after priming with irradiated carcinoma cells"Cancer Gene Therapy. (in press). (2001)

Nishitani, M., Himeno, K.等人：“一种方便的癌症疫苗疗法，在用受辐射的癌细胞引发后，使用基因枪技术体内转移白细胞介素 12 表达质粒”癌症基因疗法。

Sakai, T., Himeno, K.et al.: "Gene gun-based co-immunization of merozoite surface protein-1 cDNA with IL-12 expression plasmid confers protection against lethal Plasmodium yoelii, in A/J mice"Infect. Immun. (in press). (2002)

Sakai, T., Himeno, K.等人：“基于基因枪的裂殖子表面蛋白-1 cDNA 与 IL-12 表达质粒的联合免疫可在 A/J 小鼠中提供针对致命约氏疟原虫的保护”感染。