角膜上皮Kチャンネルのクローニングとその発現K電流の記録

角膜上皮K通道的克隆及其表达的K电流记录

• 批准号: 13771018
• 负责人: 高比良 雅之
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771018/
• 关键词: 角膜上皮; イオンチャンネル; Kチャンネル; パッチクランプ; アラキドン酸; 脂肪酸

平成13年度には、これまでに得た新鮮ウシ角膜上皮におけるKチャンネルの知見をもとに、ヒト角膜上皮培養細胞のホールセル電流を記録し、そのうちKチャンネル由来の成分を調べた。その結果、ヒト角膜上皮においても,ウシやウサギの角膜上皮と同様に、フェナメート、アラキドン酸や他の脂肪酸により増大し、ジルチアゼムで阻害される大コンダクタンスK電流が存在することが明らかとなった。その成果は、平成14年5月の第106回日本眼科学会総会において発表した。また、平成13年度から14年度にかけて、この角膜上皮大コンダクタンスKチャンネル蛋白を同定する目的で、分子生物学的手法を用いた研究を行った。我々のウシ角膜上皮の研究結果から、大コンダクタンスKチャンネルは,近年解析が進んでいる2孔性Kチャンネル(2PDK)に属することが示唆される。果たして、培養ヒト角膜上皮細胞において、2PDKのサブファミリーのうち3種類が、RNAレベルで発現していることを確認した。さらに、その3種類の2PDKのcDNAの全長をクローニングし、蛍光を指標とするベクターを用いて、培養COS細胞に導入した。導入1〜2日後、蛍光を発する細胞を蛍光顕微鏡の下で選択し、パッチクランプ法にて発現電流を調べた。その結果、既知の2PDK由来のK電流が確認され、さらにその薬理特性は、大コンダクタンスKチャンネルのそれに一致した。従って、大コンダクタンスKチャンネルは2PDKに由来すると考えられる。その結果の一部は、平成14年1月の第68回日本中部眼科学会にて発表した。また、平成15年5月のThe Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO)学会にて発表する予定である。

Pp.47-53 13 year に は, こ れ ま で に have た fresh ウ シ corneal epithelium に お け る K チ ャ ン ネ ル の knowledge を も と に, ヒ ト corneal epithelium cultured cells の ホ ー ル セ ル current を record し, そ の う ち K チ ャ ン ネ ル origin の composition を adjustable べ た. そ の results, ヒ ト corneal epithelium に お い て も, ウ シ や ウ サ ギ の corneal epithelium と with others に, フ ェ ナ メ ー ト, ア ラ キ ド ン acid や he の fatty acids に よ り raised し, ジ ル チ ア ゼ ム で resistance against さ れ る big コ ン ダ ク タ ン ス K current が exist す る こ と が Ming ら か と な っ た. Youdaoplaceholder0 そ achievements そ, the 106th Japanese Ophthalmological Society 総 meeting in May 14 of Heisei 総, にお にお て, released a statement た. ま た, pp.47-53 13 year か ら 14 year に か け て, こ の corneal epithelium big コ ン ダ ク タ ン ス K チ ャ ン ネ ル protein を with fixed す で る purpose, the technique of molecular biology を い た を line っ た. I 々 の ウ シ corneal epithelium の results か ら, big コ ン ダ ク タ ン ス K チ ャ ン ネ ル は, in recent years, analytical が into ん で い る 2 hole sex K チ ャ ン ネ ル PDK (2) に す る こ と が in stopping さ れ る. Fruit た し て, cultivating ヒ ト corneal epithelium cells に お い て, 2 PDK の サ ブ フ ァ ミ リ ー の う ち 3 kinds が, RNA レ ベ ル で 発 now し て い る こ と を confirm し た. さ ら に, そ の 3 kinds の 2 PDK の cDNA の span を ク ロ ー ニ ン グ し, 蛍 light を と す る ベ ク タ ー を with い て, cultivating COS cell に import し た. Import after 1 ~ 2, 蛍 light を 発 す る cells を 蛍 顕 light under the micromirror の で sentaku し, パ ッ チ ク ラ ン プ method に て を 発 now current adjustable べ た. そ の results, both know の PDK origin の 2 K current が confirm さ れ, さ ら に そ の 薬 characteristics は, big コ ン ダ ク タ ン ス K チ ャ ン ネ ル の そ れ に consistent し た. 従 っ て, big コ ン ダ ク タ ン ス K チ ャ ン ネ ル は 2 PDK に origin す る と exam え ら れ る. Youdaoplaceholder0 result of そ a そ, the 68th chubu Ophthalmology Society of Japan in January heisei 14 にて release schedule た. Youdaoplaceholder0 in May of Heisei 15, <s:1> The Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) にて issued a list of する to set である.

项目成果

Takahira M, Sakurada N, Segawa Y, Shirao Y.: "Two types of K+ currents modulated by arachidonic acid in bovine corneal epithelial cells"Investigative Ophthalmology & Visual Science. 42. 1847-1854 (2001)

Takahira M、Sakurada N、Sekawa Y、Shirao Y.：“牛角膜上皮细胞中花生四烯酸调节的两种 K 电流”调查眼科

Takahira M, Sakurada N, Segawa Y, Shirao Y: "Two types of K^+ currents modulated by arachidonic acid in bovine corneal epithelial cells"Investigative Ophthalmology & Visual Science. 42. 1847-1854 (2001)

Takahira M、Sakurada N、Sekawa Y、Shirao Y：“牛角膜上皮细胞中花生四烯酸调节的两种类型的 K^ 电流”调查眼科