ラット耳下腺腺房細胞における末梢型ベンゾジアゼピン受容体の機能に関する解析-ミトコンドリアからのカルシウムイオン遊離におよぼす影響-

大鼠腮腺腺泡细胞外周苯二氮卓受体功能分析-对线粒体钙离子释放的影响-

• 批准号: 13771102
• 负责人: 大久保 みぎわ
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771102/
• 关键词: ベンゾジアゼピン類; カルシウムイオン; 口腔乾燥症; ミトコンドリア; 耳下腺; 唾液腺; Na^+; K^+; 2Cl^-共役輸送; クロライドイオン; Ca^<2+>依存性K^+チャネル; 2Cl-共役輸送体

これまでに本研究室において、耳下腺腺房細胞に中枢型と末梢型両ベンゾジアゼピン受容体が存在し水分泌を抑制すること、この抑制が細胞内のCl^-貯留に起因することを明確にした。細胞内へのCl^-貯留は基底膜側からのCl^-流入促進と管腔側からのCl^-流出抑制により引き起こされ、Cl^-流入の一経路としてNa^+/K^+/2Cl^-共役輸送系の関与が証明された。H13年度はこの経路を明らかにするために、基底膜からのCa^<2+>流入の関与について検索を行った。45Ca^<2+>の取り込み実験を行った結果、中枢型と末梢型両ベンゾジアゼピン受容体アコニストのジアゼパムおよび、末梢型ベンゾジアゼピン受容体アコニストのRo5-4864は適用直後1分以内では細胞内へのCa^<2+>流入を増加させたが、それ以降の取り込みには影響を及ぼさなかった。また、カルバコール刺激時のCa^<2+>流入をジアゼパムは抑制した。ベンゾジアゼピン類による基底膜付近の局所的なCa^<2+>濃度の上昇がCa^<2+>依存性K^+チャネルを介したNa^+/K^+/2Cl^-共役輸送系に関与していることを示した。本年度はFura2を用いた細胞内Ca^<2+>濃度変化の蛍光画像解析を行った。ベンゾジアゼピン類はカルバコール刺激時の細胞内Ca^<2+>濃度の上昇を抑制したがその一方、単独で適用したときは大きな変化が認められなかった。これらの結果から、ベンゾジアゼピン類はムスカリン刺激時には細胞内Ca^<2+>濃度の上昇を抑制するが、単独で適用したとき微量ではあるが細胞内へのCa^<2+>流入を促進することが示された。また、この流入は細胞全体のCa^<2+>濃度の上昇はせず、基底膜付近で起こる局所的なCa^<2+>濃度の上昇に関与していることが示唆された。

In this study, we identified the reasons for the inhibition of Cl-retention in the cells of the auricular gland and the central and distal types of receptors. Intracellular Cl^-storage promotes Cl^-influx from the basement membrane side and inhibits Cl^-efflux from the lumen side. The relationship between Cl^-influx and Na^+/K^+/2Cl^-co-transport system is demonstrated. In fiscal year H13, we are conducting an investigation into the relationship between the flow of Ca^<2+> into the basement membrane and the future of the economy. 45Ca^<2+> and Ca^<2 +> were selected from the group consisting of the central and distal types of Ca ^<2+>, Ca ^<3 +>, Ca ^<2 +>, Ca ^<2 +>, Ca ^<3 +>, Ca ^<3 +>, Ca ^<2+>, Ca ^<3 +>, Ca ^<3 + Ca^<2+> influx is inhibited during stimulation. The relationship between Ca^<2 +> concentration and Na^+/K^+/2Cl^-co-transport system in the basement membrane was shown. This year, Fura2 was used to analyze the changes in intracellular Ca^<2+> concentration and fluorescence profile. The increase of intracellular Ca^<2+> concentration during stimulation was inhibited by the same method as that of the control group. The results showed that the increase of intracellular Ca^<2+> concentration was inhibited when the cells were stimulated, and the increase of intracellular Ca^<2 +> concentration was promoted when the cells were stimulated. The increase of Ca ^<2 +> concentration in the whole cell was related to the increase of Ca^<2+> concentration in the basement membrane.