全身的ストレスと味覚感受性に関する研究

全身应激与味觉敏感性研究

• 批准号: 13771183
• 负责人: 植原 典子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Ohu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771183/
• 关键词: Cystatin; 苦味結合タンパク質; 唾液中14kDaタンパク質; 全唾液; 硫酸キニーネ; アガロースゲル電気泳動; ウエスタンブロッティング; プロテインシークエンス

ストレス状態を把握するパラメータとして、唾液中の14kDaのタンパク質を分子生物学的に評価し、その生理活性を解明することを目的に、本年度は、唾液中14kDaのタンパク質と苦味結合タンパク質を同定するための実験を行った。実験方法は、ヒト全唾液を採取し苦味物質(硫酸キニーネ)と混和したものをサンプルとしてアガロースゲルにより電気泳動を行った。硫酸キニーネがUV下で発光することを応用し、電気泳動後に、アガロースゲルの発光した部位を切り出し、その液体成分を抽出した。これを苦味結合タンパク質のサンプルとしてSDS-PAGEを行い、ウエスタンブロッティングした。タンパク質が転写されたPVDF膜をCBB染色後、染色部位を切り出し、プロテインシークエンスを行った。一方、14kDaのタンパク質のシークエンスを行うため全唾液をサンプルとし、1次元目にnative-PAGE、2次元目にSDS-PAGEを行った。ウエスタンブロッティング後、CBB染色し、数個の、高次構造の異なる14kDaの当該部位を切り出し、プロテインシークエンスを行った。その結果、上記の数個の14kDaのタンパク質が、Cystatinファミリー2の特異なアミノ酸配列を有していた。現在、苦味結合タンパク質のプロテインシークエンスを行う準備中である。今後は14kDaのタンパク質のより多くの塩基配列を決定し、それぞれ、Cystatinの何型と一致するのか検討する。また、苦味結合タンパク質のプロテインシークエンスができ次第、14kDaのタンパク質との照合や、苦味結合能力について検討する。

The status of the ストレスを grasp the するパラメータとして, the 14kDa のタンパクquality を in saliva, the evaluation of molecular biology, and the physiological activity をExplain the purpose of the することをに, the current year, the 14kDa のタンパク性と bitter taste combined with the するための実験を行った in the saliva. The method is to collect and mix the bitter substances (sulfate sulfate) with whole saliva.したものをサンプルとしてアガロースゲルにより电気 Swimming を行った. Sulfuric acid fluoride can be used under UV light, and can be used after electrophoresis. The parts of the ガロースゲルの発光したたをcut outし, and the そのliquid component をdraws out した.これをBitterness combined with タンパク性のサンプルとしてSDS-PAGE を行い, ウエスタンブロッティングした. The タンパク性が転写されたPVDF membrane is dyed with CBB, and the dyed parts are cut out and プロテインシークエンスを行った. One side, 14kDa のタンパクquality のシークエンスを行うため全 saliva をサンプルとし, 1-dimensional object native-PAGE, 2-dimensional object にSDS-PAGE を行った.ウエスタンブロッティング后, CBB dyed し, several の, high-order structure のdifferentる14kDa の When the part is cut out, プロテインシークエンスを行った.その results, the above mentioned several 14kDa のタンパクquality が, Cystatin ファミリー2 のspecific なアミノ acid combination を有していた. Now, the bitter taste combined with the タンパク性のプロテインシークエンスを行う is being prepared. From now on, the 14kDa のタンパクquality のより多くの塩组array will be determined, それぞれ, and the cystatin type will be consistent するのか検曰する.また, bitter combination of タンパク性のプロテインシークエンスができ order, 1 The 4kDa のタンパクquality is the same as the combination of bitterness and the ability to combine bitterness.