顎関節におけるオピオイド受容体遺伝子発現の雌雄差

男性和女性颞下颌关节阿片受体基因表达的差异

• 批准号: 13771235
• 负责人: 林 勝彦
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771235/
• 关键词: オピオイド受容体; 顎関節; 雌雄差; In situ hybridization法; 免疫組織化学; ラット; μオピオイド受容体

【目的】顎関節における末梢性鎮痛作用の雌雄差を解明することを目的として、雌性ラット顎関節におけるオピオイド受容体の局在を雄性ラットと比較検討し、その局在分布様式および数的相違を明らかにする。【方法】1.ラット顎関節標本作成 同一条件下に飼育された7週齢Wister系雌性および雄性ラット、各々10匹を、4%パラホルムアルデヒド0.1M PBS溶液で灌流固定し、顎関節を摘出後さらに同固定液にて4℃、16時間浸漬固定を行った。摘出材料を10%EDTA溶液にて脱灰し、通法に従いパラフィン包埋、次いで矢状断にて厚さ4μmの連続切片を作製した。2.In situ hybridization法 μオピオイド受容体に特異的と考えられた領域(45base)を選択し委託合成したジゴキシゲニン標識オリゴヌクレオチドプローブを用い、非放射線性ジゴキシゲニン法を応用した。さらにアルカリフォスファターゼ発色により核酸を検出した。3.免疫組織化学的染色 抗μ(ケミコン・AB1562)、抗δ(ヶミコン・AB1560)、抗κ(Upstate biotechnology・KOR-1計3種のオピオイド受容体に対するポリクローナル抗体を用いて間接法(PAP法)にて施行した。4.データ解析 上記実験により得られた標本の組織像をコンピューターへ画像入力し、画像解析システムにて陽性スポット数を定量的に分析した。【結果】ラットの顎関節滑膜におけるμオピオイド受容体mRNAシグナル数は、雌雄間において有意差を認めなかった。また、μ、δ、κオピオイド受容体の免疫組織化学的検索の結果、各オピオイド受容体は滑膜や前後方部結合組織に局在した。さらに、μおよびδオピオイド受容体数に定量的な雌雄差は認めなかったが、κオピオイド受容体の陽性数は雄性ラットにおいて有意に多かった(Mann-Whitney test, P<0.05)。

目的：为了阐明颞下颌关节中周围镇痛作用的差异，我们将比较和检查雌性大鼠与雄性大鼠的颞下颌关节的定位，并阐明定位和数值差异的分布。 [方法] 1。制作大鼠颞下颌关节标本。在相同条件下饲养的十个7周龄的女性和雄性大鼠灌注并用4％多聚甲醛的0.1m PBS溶液固定，并去除颞下颌关节，然后在4°C下浸入并固定在同一固定溶液中16小时。切除的材料在10％EDTA溶液中脱钙，根据该方法嵌入石蜡，然后以4μm的厚度制备矢状连续切片。 2。原位杂交方法使用非放射性二高氧蛋白方法使用二氧素标记的寡核苷酸探针应用，该寡核苷酸探针是通过委托被认为特定于μ阿片类药物受体的区域（45base）来选择和合成的。此外，通过碱性磷酸酶着色检测到核酸。 3。免疫组织化学染色：针对三种类型的阿片类药物受体的多克隆抗体，包括抗μ（Chemicon AB1562），抗δ（Gamicon AB1560）和抗κ（Upstate Biotechnologicy，kor-1），使用Indirect方法（PAP方法）进行。 4。数据分析将从上述实验获得的标本的组织学图像输入到计算机中，并使用图像分析系统定量分析了正斑的数量。结果：在雄性和女性之间，观察到大鼠颞颌关节滑膜中阿片受体mRNA信号的数量无显着差异。此外，阿片受体的数量位于滑膜和后结缔组织中。此外，尽管在μ和δ阿片受体的数量上没有定量差异，但雄性大鼠的阳性κ阿片类受体的数量明显更高（Mann-Whitney检测，P <0.05）。