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歯周病原性細菌の培養上清中に存在する新規マクロファージ致死毒素の構造決定

牙周病原菌培养上清液中新型巨噬细胞致死毒素的结构测定

基本信息

批准号：
13771259
负责人：
金輪真佐美
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771259/
关键词：
Actinobacillus actinomycetemcomitans マクロファージアポトーシス U937細胞致死

项目摘要

私は歯周病原性細菌であるActinobacillus actinomycetemcomitans(A.a.)Y4株のマクロファージに対する障害活性を追求し,非常に強い致死活性(アポトーシス)がA.a.培養上清中に存在することを見い出し,障害因子の精製を行った。A.a.の培養はBHI培地にて嫌気下で対数増殖期後期まで培養後1,000gの遠心にて菌体と上清を分離後,0.22μmのフィルターに通したものを培養上清とし実験に供した。TOYOPEARL AF-Blue-650ML(TOSOH)を5mlのシリンジにつめ0.1Mリン酸バッファー(pH7.4)で平衡化されたゲルに培養上清をカラムに通し0.1Mリン酸バッファーで洗浄後,1,2,3 MNaCl-0.1MPBにて溶出した。それぞれの溶出画分を3000カットの限外ろ過膜(アミコン社)にて脱塩,バッファー交換を行った。各々の画分100μlを連続希釈し,用意されたPMA-U937細胞(マクロファージ様細胞)に添加し30分間作用させた。培地交換後WST-1溶液を10μl添加,1時間インキュベートした後波長405nmで吸光度を測定した。PBS処理したもののOD値を基準とし50%細胞障害活性を認めたところの連続希釈値をactivity(U)とした。現在1,2Mの画分に致死活性を確認し,SDSポリアクリルアミド電気泳動等致死活性因子について分析を行なっている。

The pathogenic bacteria were isolated from Actinobacillus actinomycetemcomitans (A.a.) Y4 strains, which showed strong lethal activity and strong lethal activity. In the supernatant of Pei Yun, there are some problems in the supernatant, and the barrier factor is known to be fine. A.a. In the later period of the reproductive period, after 1000 g of culture, the supernatant of the bacteria was separated, and then the supernatant of the supernatant was collected. After the culture, the supernatant of the bacteria was separated, and the supernatant was collected. TOYOPEARL AF-Blue-650ML (TOSOH), 5ml, acid, acid The solution of the painting is 3000%. The film is limited to the outside. (the company) is free of contact. Each user has a score of 100 μ l and is intended to add a 30-minute response to the PMA-U937 cell. After incubation, the WST-1 solution was added at 10 μ l, and the wave length 405nm absorbance was determined after 1 hour of incubation. PBS is sensitive to OD. The cytotoxicity level is 50%. Please contact activity (U) for cytotoxicity. At present, the lethal activity was confirmed in 1m painting, and the lethal activity factors, such as SDS, electrophoresis and other lethal activity factors, were confirmed and analyzed.