肝臓および骨格筋におけるアミノ酸輸送担体システムAのホルモンによる発現制御

肝脏和骨骼肌中氨基酸转运载体系统A表达的激素调节

• 批准号: 13771365
• 负责人: 菅原 満
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771365/
• 关键词: アミノ酸トランスポータ; システムA; 活性制御; ホルモン; インスリン; 骨格筋; 中性アミノ酸; 肝臓; グルカゴン

【目的】肝臓や骨格筋において中性アミノ酸輸送に重要な働きを持つ輸送担体システムAは従来よりその輸送活性がホルモンの影響を受けることが報告されてきたが,その実体は明らかにされていなかった.申請者らは最近,本輸送担体蛋白のcDNAのクローニングに成功したことから,今後,分子生物学的,蛋白化学的解析が可能となることが期待できる.本研究ではラット骨格筋由来のL6細胞を用いてシステムAの輸送活性を評価し,インスリンによる輸送活性の変化の機構を明らかにすることを目的とした.【方法】システムAの活性評価は特異的基質であるα-Methylaminoisobutyric acid(MeAIB)の取り込みにより評価した.システムAmRNA発現量はRT-PCR法を用いて評価した.【結果】L6細胞へのMeAIBの取り込み速度はインスリン処理により増大した.そこで,種々の濃度におけるMeAIB取り込み速度を測定し,速度論的パラメーターを算出したところ,インスリン処理により最大輸送活性(Vmax)のみが増大し,親和性(Km)には変化は認められなかった。そこで,クロロキン,シクロヘキシミドおよびアクチノマイシンDを阻害剤として用い,インスリンによる取り込み増大作用に与える影響を検討した.その結果,いずれの阻害剤もインスリンによるMeAIBの取り込み増大効果を抑制した.また,インスリン処理,未処理の細胞から抽出したtotal RNAを用いてRT-PCRの手法によりシステムAのmRNA量を比較したところ,インスリン処理群では未処理群に比べて1.64倍の増大が認められた.これらの結果より,システムAアミノ酸トランスポーターのインスリンによる活性増大の機構として,mRNA増大に伴うトランスポーター蛋白質の合成促進と細胞内プールから形質膜へのトランスロケーションが関与していることが示唆された.

[Objective] To study the effect of acid transport on the activity of liver and kidney cells.[Objective] To study the effect of acid transport on the activity of liver and kidney cells. Recently, the cDNA of the carrier protein has been successfully analyzed. In the future, molecular biology and protein chemistry analysis are possible. The purpose of this study is to evaluate the transport activity of L6 cells in the origin of bone marrow cells and to clarify the mechanism of transport activity. [Method] The activity of the enzyme A was evaluated on the basis of α-Methylaminoisobutyric acid(MeAIB). AmRNA expression was evaluated by RT-PCR. [Results] The speed of MeAIB selection in L6 cells increased rapidly. MeAIB is used to determine the concentration of species, calculate the velocity of species, increase the maximum transport activity (Vmax), and increase the affinity (Km). In this paper, we discuss the influence of the influence of the increasing effect of the resistance agent on the environment. As a result, MeAIB's enhancement effect is suppressed by the increase in the resistance of the inhibitor. Total RNA was extracted from untreated cells using RT-PCR and the mRNA level in untreated cells increased 1.64 fold compared with untreated cells. As A result, the mechanism of increased activity of protein A,mRNA, and protein synthesis in cells was investigated.