分光学的手法を用いたヌクレオソーム高次構造変換過程の解析

利用光谱方法分析核小体构象转变过程

• 批准号: 13780482
• 负责人: 島原 秀登
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Japan Advanced Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780482/
• 关键词: ヌクレオソーム; ヒストン; CD; 組換え; HMG14; 17; アセチル化

染色体蛋白質HMGN1(14)、HMGN2(17)は146bpヌクレオソームに特異的に結合する核蛋白質である。これら二つの構造が類似する蛋白質はヌクレオソームにそれぞれ協同的に結合し、その結果、どちらか一方を二分子含む複合体を形成する。ヌクレオソームにHMGN1/N2が結合するとクロマチン超高次構造が解け、転写や複製等のDNA依存型活性が増強される。HMGN1を用いた例でこの現象は、遺伝子発現を抑制するリンカーヒストンH1と、HMGN1の競合的な相互作用によって引き起こされ、HMGN1のC端とヒストンH3のN端の特異的な相互作用によって促進、その結果最終的にヌクレオソームにヒストンアセチル化酵素のような様々な調節因子がアクセスすると考えられている。最近では、HMGN1/N2自身のアセチル化によってヌクレオソームとの相互作用様式が変化すると報告されている。一方、HMGN2-ヌクレオソームはクロマチンファイバー中で幾つかの集中点に寄り集まり、さらに核中全体で組織化される。高く転写が活性化された細胞の中で、HMGN1/N2の集中点の核内分布は転写部位の分布と等しい位置関係にあることがわかっている。ヌクレオソーム構造変化に対するヒストンとHMGN1/N2の翻訳御修飾の影響を研究するために、まず非修飾蛋白質によって構成されたヌクレオソーム、HMG-ヌクレオソーム複合体の特性を観察する必要がある。私たちは、大腸菌によって非修飾ヒストン、HMGを合成させ、TATAAACGCC繰返しヒストン高親和性配列DNAと、塩濃度を下げることにより、ヌクレオソームを再構成した。その結果、Native PAGEによって、この配列を有するヌクレオソームに特徴的なMNase処理による周期的な(10bp毎)の切断断片を観察し、化学的構造的に一系のヌクレオソームが再構成されていることを確認した。HMGとの相互作用による、ヒストンコアをとりまくDNAの構造変化を観察するためにCD測定を行った結果、HMG-ヌクレオソーム複合体形成時のDNAモル楕円率は、ヌクレオソームのものと比較して負の方向に変化した。この結果、HMG-ヌクレオソーム複合体形成時コアDNAの超らせん性は、解けるよりむしろ締まるということを示している。これらの結果をJournal of Biochemistryに投稿した。

The chromosomal proteins HMGN1 (14) and HMGN2 (17) were combined with ribosomal proteins specific for 146bp proteins. The binder is similar to the binding, the result, and the two molecules that contain a complex to form a complex. In order to improve the DNA-dependent activity, such as ultra-high-order HMGN1/N2 analysis, write-copy and other DNA-dependent activity tests. HMGN1 uses an example to suppress the interaction between H3 and H3, the interaction between H3 and H 1, the interaction between HMGN1 and H3, and the interaction between H3 and H3. The results show that the enzyme enzyme is the most effective. The factor is the best. Recently, the HMGN1/N2 itself has reported that there is an interaction between the two countries. On the one hand, the HMGN2- system is responsible for the distribution of the data in the center, and the organization of all the members in the core. The location, location and location. It is necessary to study the properties of the complex, such as HMGN1/N2, protein, and the properties of the complex. Private medicine, large bacteria, non-repair drugs, HMG synthesis, TATAAACGCC synthesis, and sexual configuration DNA, temperature, temperature, The result of the experiment, the Native PAGE response, and the configuration of the MNase operation cycle with the special information, the 10bp cut-off fragment inspection, the chemical manufacture of the first series of equipment, and then the confirmation of the device. The results of the HMG interaction test, the HMG- interaction test, the CD test results, the DNA failure rate during the formation of the DNA complex, and the response direction of the DNA complex were observed. The results of the test, the DNA overload when the HMG- copy was formed, and the resolution of the test results. The result of this review is that Journal of Biochemistry will submit a contribution.