ホヤ胚を用いた分裂回数を制御する因子の探索

使用海鞘胚胎寻找控制分裂数量的因素

• 批准号: 13780595
• 负责人: 山田 温子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Konan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780595/
• 关键词: ホヤ; 分裂回数; 14-3-3; CAB; 細胞分化; 細胞周期; 不等分裂; MS; cdc45

本研究の目的は細胞分裂回数を制御する因子を探索することであり,本年度は14-3-3遺伝子に着目して研究を行った。哺乳類では7種の14-3-3遺伝子が存在し,細胞周期を含む様々な発生過程に機能している。今回,京大,佐藤らによるcDNAプロジェクトの結果を検索したところ,ホヤ胚には少なくとも7種の14-3-3遺伝子が存在するものの,哺乳類の分子種とは一対一対応しないことが分かった。ホヤ独自の遺伝子重複が起こった可能性が考えられる。これらホヤ14-3-3遺伝子のうち,本研究では2分子に注目し解析を行った。(1)14-3-3ε-a:この遺伝子はホヤ神経胚期以降の予定筋肉細胞で強く発現する。神経胚期は。筋肉細胞の最終分裂期であることから,この遺伝子が筋肉細胞の分裂停止を制御している可能性があった。そこで,ホヤ胚に異所的な筋分化を引き起こす実験系(筋肉決定因子Cimachoや:MyoDのホヤホモログの過剰発現胚,及びMEK阻害剤処理胚)において14-3-3ε-aの発現を調べたところ,異所的発現が観察された。即ち,この遺伝子の発現は筋分化に密接に関係していることが分かった。次に,モルフォリノオリゴ注入による14-3-3ε-aの機能阻害実験を行ったが,初期卵割や形態形成に異常はみられず,筋細胞数の変化も観察されなかった。用いたモルフォリノオリゴがin vivoで翻訳阻害効果を持っていなかった可能性があるため,分裂停止に関するこの遺伝子の役割は不明のままである。(2)14-3-3ε-b:市販の抗14-3-3抗体は,ホヤの不等分裂に関わるCABを認識した。この抗体による免疫沈降産物をMS/MSによって解析したところ,14-3-3ε-bであると同定された。線虫やハエでは14-3-3がPAR-1と結合し不等分裂を制御する。このころから,ホヤにおいても14-3-3が不等分裂に関与している可能性が示唆された。

Purpose の this study は cell division in commutation を suppression す る factor を explore す る こ と で あ り, は this year the 14-3-3 legacy 伝 son に with mesh し を line っ て research た. Mammals で は seven の the 14-3-3 legacy 伝 が exist し, cell cycle を containing む others 々 な 発 に birth process function し て い る. Today, Beijing is big, sato ら に よ る cDNA プ ロ ジ ェ ク ト の results を 検 cable し た と こ ろ, ホ ヤ embryo に は less な く と も seven の the 14-3-3 legacy 伝 son が exist す る も の の, mammals の molecules of と は a a 応 seaborne seaborne し な い こ と が points か っ た. The possibility of ホヤ independent cultural heritage 伝 sub-repetition starting from が えられる った が examination えられる. Youdaoplaceholder6 れらホヤ14-3-3 remains 伝 sub-molecule うち うち. In this study, で で 2 sub-molecules に focus on <s:1> analysis を line った. (1)14-3-3ε-a: <s:1> cultural heritage 伝 offspring ホヤ ホヤ from the embryonic stage to the embryonic stage, <s:1> predefined muscle cells で strongly く appear する. The embryonic stage of the divine economy youdaoplaceholder7. Brawn cells の eventually split phase で あ る こ と か ら, こ の heritage 伝 son が の brawn cell divides stop を suppression し て い る possibility が あ っ た. そ こ で, ホ ヤ embryo に な muscle differentiation を led by different き up こ す be 験 system (brawn decision factor Cimacho や : MyoD の ホ ヤ ホ モ ロ グ の before turning 発 embryo, and び MEK resistance against tonic 処 embryo) に お い て epsilon 14-3-3 -a の 発 now を adjustable べ た と こ ろ, what different 発 now が 観 examine さ れ た. That is, ち, the 伝 cultural heritage 伝 has <s:1> tendon differentiation, に close contact に relationship, <s:1> て る る とが とが とが 伝 った った った った った った った とが とが った った った った った った とが とが とが 伝 った った った. に, モ ル フ ォ リ ノ オ リ ゴ injection に よ る epsilon 14-3-3 -a の function resistance against be 験 を line っ た が, early egg cut や morphogenetic に abnormal は み ら れ ず, muscle cells number の variations change も 観 examine さ れ な か っ た. With い た モ ル フ ォ リ ノ オ リ ゴ が in vivo で turn 訳 resistance against unseen fruit を hold っ て い な か っ た possibility が あ る た め, split stop に masato す る こ の heritage 伝 child cut は の service unknown の ま ま で あ る. (2)14-3-3ε-b: Commercially available <s:1> anti-14-3-3 antibody,ホヤ <s:1> unequal division に related わるCABを understanding た た. こ の antibody に よ る immune sink product を MS/MS に よ っ て parsing し た と こ ろ, epsilon 14-3-3 - b で あ る と with fixed さ れ た. Nematode やハエで やハエで 14-3-3がPAR-1と binds to <s:1> unequal division を to control する. こ の こ ろ か ら, ホ ヤ に お い て も range 14-3-3 が split に masato and し て い が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

Katano M.et al.: "Utilization of ribozymes for loss-of-function analyses of the early development of the ascidian Ciona intestinalis"Mem.Kona Univ., Sci.Eng.Ser.. 48. 11-20 (2001)

Katano M.等人：“利用核酶对海鞘海鞘早期发育的功能丧失进行分析”Mem.Kona Univ.，Sci.Eng.Ser.. 48. 11-20 (2001)