GnRHニューロンにおけるKCCトランスポーター発現量の発達変化

GnRH 神经元 KCC 转运蛋白表达的发育变化

• 批准号: 13780640
• 负责人: 美津島 大
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780640/
• 关键词: 性差; 発達; 性成熟; GABAA受容体; Cl-; ゴナドトロピン; Northern Blot; 視床下部; GnRH; GABA; KCCトランスポーター; 黄体形成ホルモン; CABAA受容体; 雄性ラット; 内側視索前野

GnRH(ゴナドトロピン放出ホルモン)は、動物の生殖機能を制御する最上位の視床下部ホルモンであり、ラットではGnRHニューロンの細胞体は内側視索前野(MPO)に多数分布している。GnRHニューロンに対する制御系の発達が、個体レベルでの生殖機能の発達変化に直結している。GABAのGABA_A受容体を介する作用は、胎生期には主に興奮性で、出生後には主に抑制性に変化するが、この変化は細胞内Clイオン濃度に依存していることが明らかにされた。細胞内のClイオン濃度はKイオン-Clイオン共輸送担体であるKCC1とKCC2によって調節されていると考えられてきたが、マウスでKCC3やKCC4が新たにクローニングされ、これらKCCトランスポーターが複合的にGABA_A受容体の活動性を調節していると考えられる。昨年度、ラット内側視索前野(POA)や視床下部内側底部(MBH)におけるこれらmRNAの存在をRT-PCR法を用いて検討し、POAやMBH内にKCC1は存在しないが、KCC2、KCC3、KCC4の各mRNAの存在を確認した。今年度は生後1、3、7、16、22、30日目の雌雄のラットにおけるMPO内のKCC3のmRNA発現量をNorthern Blot法により定量した。MPO領域を速やかに切り出し、定型的にRNAを抽出後、Northern Blot法によりKCC3のmRNA発現量を定量し、発達変化と性差について検討した。その結果、ラットMPO内mRNAにおけるKCC3 mRNAは約7.4kbであることがはじめて確認された。また、KCC3の発現量をcyclophilin mRNAの発現量で補正したところ、発達に伴う有意な発現量の減少が認められた。ポストホツク解析により詳しく発現量を比較したところ、1日齢におけるKCC3 mRNA発現量と比べ、3日齢で有意な減少が確認され、7、16、22、30日齢ではさらに減少して16日齢以降は、1日齢の約半分の発現量であることが明らかとなった。また、Two-way ANOVAにより有意な性差も確認され、雌性ラットでは雄性ラットよりも全般的に発現量が多いことも明らかとなった。

GnRH(GnRH) is mainly distributed in the lower part of the optic bed at the top of the reproductive function control system of animals. The development of GnRH control system and the development of individual reproductive function are directly related to GnRH control system. GABA_A receptor mediates the effects of GABA_A receptor on the growth and development of GABA_A. Intracellular Cl ~-concentration K ~-Cl ~-co-transporter KCC1 and KCC2 regulate the activity of GABA_A receptor in KCC3 and KCC4. The presence of KCC1, KCC2, KCC3 and KCC4 mRNA in POA and MBH was detected by RT-PCR. The mRNA expression of KCC3 in MPO was quantified by Northern Blot at 1, 3, 7, 16, 22, 30 days after birth. The expression of KCC3 mRNA was quantified by Northern Blot, and the expression of KCC3 mRNA was detected by PCR. The mRNA in MPO was approximately 7.4 kb long. The expression of cyclin mRNA was corrected and the expression of KCC3 was accompanied by a decrease in the expression of cyclin mRNA. KCC3 mRNA expression was significantly decreased on day 1, and significantly decreased on day 3, and significantly decreased on day 7, 16, 22, and 30. Two-way ANOVA is used to determine whether there is a significant difference in sex between males and females.

项目成果

Tin-Tin-Win-Shwe et al.: "Profiles of in vivo GABA release in the medial preoptic area of intact and castrated male rats"Neuroendocrinology. 76. 290-296 (2002)

Tin-Tin-Win-Shwe 等人：“完整和去势雄性大鼠内侧视前区体内 GABA 释放概况”神经内分泌学。

Mitsushima D. et al.: "GABA release in the medial preoptic area of cyclic female rats"Neuroscience. (in press). (2002)

Mitsushima D. 等人：“周期性雌性大鼠内侧视前区的 GABA 释放”神经科学。

Mitsushima D. et al.: "Increase in the number of detectable preoptic GAD67 immunoreactive cells in immature male rats"Neuroscience Research. 40. 141-146 (2001)

Mitsushima D. 等人：“未成熟雄性大鼠中可检测的视前 GAD67 免疫反应细胞数量的增加”神经科学研究。

Mitsushima D. et al.: "Rats living in small cages respond to restraint stress with adrenocortical corticosterone release but not with hippocampal acetylcholine release"Psychoneuroendocrinology. (in press). (2003)

Mitsushima D.等人：“生活在小笼子里的老鼠通过肾上腺皮质皮质酮释放来应对束缚应激，但不通过海马乙酰胆碱释放来应对”精神神经内分泌学。

Mitsushima D. et al.: "Impairment of maze learning in rats by restricting environmental space"Neuroscience Letters. 297. 73-76 (2001)

Mitsushima D. 等人：“通过限制环境空间来损害大鼠的迷宫学习”神经科学快报。