不死化心筋細胞株の作成に関する研究

永生化心肌细胞系的构建研究

• 批准号: 13877214
• 负责人: 米田 正始
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13877214/
• 关键词: 不死化遺伝子; 細胞移植; ドナー細胞

心臓では、最終分化した成熟心筋細胞はそれ自身増殖能力を持たず、また、幹細胞なるものは存在しない。よって成熟心筋細胞を増殖させる事は不可能であるとされている。しかし、もし仮に成熟心筋細胞を増殖する事が可能ならば、その成果は多大なものになる。また、近年の遺伝組換え技術の発展は目覚ましく、遺伝子発現を自由に制御する事が可能となっている。そこでシミアンウイルス40ラージT抗原遺伝子(SV40Tag)をCre/loxPシステムを用い、ONからOFFの制御を行えるように、培養中の心筋細胞に導入することを考えた。すなわち、癌遺伝子を利用し、心筋細胞を増殖させた後、Cre/loxPシステムを用い癌遺伝子を不活性化し、これを細胞移植に利用することを目標とした。一対のloxP配列間に単純ヘルペスウイルス-チミジンキナーゼ(HSV-TK)融合遺伝子と癌遺伝子であるSV40Tagをコードし、その3'下流にネオマイシン耐性遺伝子(NeoR)をコードしたレトロウイルスベクターを作成した。これをマウス繊維芽細胞株である3T3細胞に感染させた後、ハイグロマイシンを含む培養液中で培養した。2日間培養後、一部の細胞が生存した。この細胞を単離し、増殖させた後RT-PCR法でシミアンウイルス40ラージT抗原の遺伝子発現を調べた結果、確かにこの遺伝子発現を認めた。次にラットの成熟心筋細胞(心室筋、心房筋)を単離後、同様にレトロウイルスベクターに感染させた。しかし、これらの遺伝子は心筋細胞に導入されることはなく、ハイグロマイシン培養液中では生存細胞を認めなかった。そこで、胎児心筋細胞を同様に処置したが、結果は同様で遺伝子導入は困難であった。現在、レトロウイルスベクターの力価を高くしたり、感染処置中の条件を変更したりしてさらに検討中である。

The ability of mature cardiomyocytes to proliferate themselves is maintained, and the ability of mature cardiomyocytes to differentiate is maintained. Stem cells are present. The reproduction of mature myocardial cells is impossible.しかし、もし仮にMature cardiac cells をproliferationする事がpossibleならば、その Resultsは大なものになる.また、In recent years, the technology has been developed and the technology has been developed, and the technology has been free and controlled, and it is possible.そこでシミアンウイルス40ラージT antigen 缝子(SV40Tag)をCre/loxPシステムを用い、ONからOFFのcontrolled を行えるように、The heart muscle cells in culture are introduced することを考えた.すなわち, Cancer Relics を Utilization し, Cardiac Cells を Propagation させた后, Cre/loxP シスIt is used to inactivate cancer cells and use them for cell transplantation and target them.一対のloxP allocation room pure ヘルペスウイルス-チミジンキナーゼ(HSV-TK) fusion legacy と cancer legacy 伝子であるSV40 Tag をコードし、その3'Dirty にネオマイシンpatience 伝子( NeoR)をコードしたレトロウイルスベクターを成した. After infecting the これをマウス繊vitamin cell strain である3T3 cells into させた, the ハイグロマイシンをcontaining culture medium was cultured in the でした. After 2 days of culture, some cells will survive. RT-PCR method after cell isolation and propagation でシミアンウイルス40ラージT antigen の缝子発appears をadjusted べた results, confirmed かにこの缝子発appears をidentificationめた. After the mature myocardial cells (ventricular myocardium, atrial myocardium) are isolated, they are infected with the same myocardial myocardial cells.しかし, これらの缝子はcardiac cells are introduced into されることはなく, ハイグロマイシン culture medium and をidentify めなかった. The result is that the fetal heart muscle cells are treated the same way, and the result is the same as the introduction of the remaining cells, which is difficult. Now, レトロウイルスベクターの力価を高くしたり, infection treatment is under condition を変change したりしてさらに検 Discussion in である.