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組み換え単純ヘルペスウイルス(HSV)による脊髄炎の発生病理

重组单纯疱疹病毒（HSV）引起的脊髓炎的病理学

基本信息

批准号：
13770088
负责人：
金城貴夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
University of the Ryukyus
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770088/
关键词：
HSV2 組み換えウイルス神経毒性 HSVgD HSVgB

项目摘要

背景HSVの感染はウイルスの膜蛋白と細胞表面蛋白との結合、融合を経てウイルスゲノムが細胞内に侵入する事で成立する。我々はこの過程においてgDに注目し、我々の保有する様々な毒性を示すHSV2株について解析を試みた。方法(1)HSV2の沖縄株(K1〜K4)とチェンマイ株(C1〜C4)のgD領域の塩基配列の比較・検討沖縄株4株とチェンマイ株4株をそれぞれVero細胞に感染させcytopathic effect(CPE)が生じた時点で超遠心法でウイルスDNAを抽出する。Bgl IIで切断した後L fragmentを回収し、pBluescript IIにクローニングする。塩基配列を決定し、株間での塩基配列の相同性や繰り返し配列の出現頻度さらにGC含量を比較する。(2)HSV2のgD欠損株の作製(a)recombinant plasmidの作製(b)recombinant virusの作製(c)gD rescue株の作製(3)マウスヘのgD欠損株あるいはgD rescue株の接種マウスにgD欠損株やg Drescue株を接種し、野生型との毒性の違いを検討する。(a)病変の拡がりや程度を組織学的に検討する。特に病変部位におけるウイルスの存在をin situ hybridizationで確認する。(b)ウイルスの感染臓器をPCRで検出する。結果チェンマイ株(C1〜C4)は沖縄株(K1,K3とK4)より毒性が強い事を報告したが、これらをVero細胞に感染させ、CPEの出現を比較したところ、時間的な差は軽度あるもののどの株も全ての細胞にCPEが現れた。従って、in vitroでは毒性の違いは軽度であるが、ウイルスを投与した場合は宿主の免疫系の違いや神経細胞に対する親和性の違いなどにより病原性の差が明確になる事が分かった。

Background HSV infection involves the binding and fusion of its membrane proteins and cell surface proteins, and the establishment of an intracellular invasion mechanism. The virus was detected in HSV-2 strain and analyzed by PCR. Methods (1) Comparison of gene alignment in gD domain between HSV 2 isolates (K1~K4) and HSV 2 isolates (C1~C4). Four HSV 2 isolates and HSV 2 isolates were examined for cytopathic effect (CPE) in Vero cells. Bgl II cut off after L fragment return, pBluescript II cut off after L fragment return. The determination of nucleotide alignment, the similarity of nucleotide alignment between plants, the frequency of nucleotide alignment, and the comparison of GC content (2) Operation of HSV 2 gD deficient strain (a) Operation of recombinant plasmid (b) Operation of recombinant virus (c) Operation of gD rescue strain (3) Inoculation of HSV 2 gD deficient strain (b) Operation of recombinant virus (c) Operation of gD rescue strain (c) Inoculation of HSV 2 gD deficient strain (b) Operation of recombinant virus (c) Operation of gD rescue strain (c) Inoculation of HSV 2 gD deficient strain (b) Operation of recombinant virus (c) Operation of gD rescue strain (c) Inoculation of HSV 2 gD deficient strain (b) Operation of gD rescue strain (c) Inoculation of HSV 2 gD deficient strain (c) Inoculation of HSV 2 gD deficient strain (d) Inoculation of HSV 2 gD deficient strain (d) Inoculation of HSV 2 gD deficient strain (d) Inoculation of HSV 2 gD rescue strain (d) Inoculation of HSV 2 gD deficient strain (d) Inoculation of HSV 2 gD deficient strain (d) Inoculation of HSV 2 gD rescue strain (d) (a)The degree of disease and histological examination were discussed. The presence of a specific disease site is confirmed in situ hybridization. (b)The virus infection was detected by PCR. The results showed that the toxicity of the two strains (C1~C4) was higher than that of the other strains (K1, K3 and K4). In vitro, the difference in virulence between the host immune system and the nervous system is clear.