科を超えた自然発生リコンビナント(組み換え）ウイルスが獲得する能力の解明

阐明天然存在的超越家族的重组病毒获得的能力

• 批准号: 22K07084
• 负责人: 大場 真己
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07084/
• 关键词: 組換えウイルス; 豚エンテロウイルスG; 豚トロウイルス; EVG-Type1; EVG-Type2

本研究で研究対象としているエントロウイルスは、エンテロウイルスとトロウイルスの自然発生組換えによって生じたウイルスであり、エンテロウイルスの一部にトロウイルスの一部（PLCP；パパイン様システインプロテアーゼ）が挿入されたゲノム構造をしている。エンテロウイルスにトロウイルスの一部が挿入されたものを EVG-Type1と呼び、エンテロウイルスのゲノムのうち構造タンパクをコードする部分が欠落し、代わりにトロウイルスの一部が挿入されたものを EVG-Type2 と呼んでいる。本研究では、まず、挿入された PLCP がタンパクとして機能できる状態で発現されるのかを明らかにしたいと考えている。 EVG_Type2 の全長配列を合成し、細胞内でレプリコンとして複製されるような状態を作ること、また PLCP をはじめとする EVG-Type2 の各種遺伝子がコードするタンパクの抗体を作成して細胞中の PLCP をはじめとしたタンパクがプロセッシングを受けているかどうかをウェスタンブロットで確認することを目指した。レプリコンに関しては、EVG-Type2 全長ゲノムに相当する塩基配列を PCR で合成することができた。しかし、細胞に導入するのに十分な量が得られておらず、プライマーの改変等を経て実験を継続中である。抗体に関しては、EVG-Type2 の各タンパクの一部に相当する合成ペプチドを外注しマウスの免疫に使用したが、残念ながら特異的な抗体が得られなかった。そこで、各タンパクのリコンビナントを培養細胞で作成してからリコンビナントタンパクでマウスを免疫する方法に切り替えた。現在はリコンビナントタンパクの合成を実施中である。また、エンテロウイルスと共感染を予定しているブタのトロウイルスは難分離ウイルスであり現在も分離ができていないが、リバースジェネティクス法での入手の検討を開始している。

This study is about the subjects of the としているエントロウイルスは, エンテロウイルスとトロウイルスのnatural growth group replacement えによって生じたウイルスであり,エンテロウイルスの一一にトロウイルスの一一(PLCP;パパイン様システインプロテアーゼ) がINSERT されたゲノムSTRUCTURE をしている.エンテロウイルスにトロウイルスの一がINSERTされたものをEVG-Type1 とHUび, エンテロウイルスのゲノムのうちSTRUCTURE タンパクをコードするPart of the part is missing, generation of わりにトロウイルスの一一がinsertされたものをEVG-Type2 とHUんでいる. This studyでは、まず、insertされた PLCPがタンパクとして Function できる Status で発appear されるのかを明らかにしたいと考えている. EVG_Type2 full-length arrangement を synthesis し, intracellular でレプリコンとして copy されるようなstate を ること, また PLCP をはじめとするEVG-Type2 PLCP in cells produced by various leftover antibodiesをはじめとしたタンパクがプロセッシングを得けているかどうかをウェスタンブロットでConfirmation することを Eyes refers to した.レプリコンに关しては, EVG-Type2 full-length ゲノムにequivalent する婩组arrayをPCR ですることができた.しかし, cell に import するのに十がget られておらず, プライマーの开変wait を経て実験を継続中である. Antibody に关しては、EVG-Type2のeach タンパクの一にequivalent する synthesized ペプチドを External Note しマウスのThe immune system uses the antibody specific to the immune system.そこで, each タンパクのリコンビナントを cultured cells are made してからリコンビナントタンパクでマウスをimmune する method に cut り substitute えた. Now the はリコンビナントタンパクの synthesizes the を実Shi中である.また, エンテロウイルスとco-infection をしているブタのトロウイルスは is difficult to separate ウイルスでありNow もseparation ができていないが, リバースジェネティクス法での入の検问をstart している.