科を超えた自然発生リコンビナント(組み換え）ウイルスが獲得する能力の解明

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本研究で研究対象としているエントロウイルスは、エンテロウイルスとトロウイルスの自然発生組換えによって生じたウイルスであり、エンテロウイルスの一部にトロウイルスの一部（PLCP；パパイン様システインプロテアーゼ）が挿入されたゲノム構造をしている。エンテロウイルスにトロウイルスの一部が挿入されたものを EVG-Type1と呼び、エンテロウイルスのゲノムのうち構造タンパクをコードする部分が欠落し、代わりにトロウイルスの一部が挿入されたものを EVG-Type2 と呼んでいる。本研究では、まず、挿入された PLCP がタンパクとして機能できる状態で発現されるのかを明らかにしたいと考えている。 EVG_Type2 の全長配列を合成し、細胞内でレプリコンとして複製されるような状態を作ること、また PLCP をはじめとする EVG-Type2 の各種遺伝子がコードするタンパクの抗体を作成して細胞中の PLCP をはじめとしたタンパクがプロセッシングを受けているかどうかをウェスタンブロットで確認することを目指した。レプリコンに関しては、EVG-Type2 全長ゲノムに相当する塩基配列を PCR で合成することができた。しかし、細胞に導入するのに十分な量が得られておらず、プライマーの改変等を経て実験を継続中である。抗体に関しては、EVG-Type2 の各タンパクの一部に相当する合成ペプチドを外注しマウスの免疫に使用したが、残念ながら特異的な抗体が得られなかった。そこで、各タンパクのリコンビナントを培養細胞で作成してからリコンビナントタンパクでマウスを免疫する方法に切り替えた。現在はリコンビナントタンパクの合成を実施中である。また、エンテロウイルスと共感染を予定しているブタのトロウイルスは難分離ウイルスであり現在も分離ができていないが、リバースジェネティクス法での入手の検討を開始している。