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遺伝子操作を利用したホヤ卵後極に局在するmRNAの局在機構の解析

基因操作分析海鞘卵后极mRNA定位机制

基本信息

批准号：
02J00967
负责人：
笹倉靖徳
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J00967/
关键词：
カタユウレイボヤ挿入変異体トランスポゾン Minos エレクトロポレーション変態遺伝子操作トランスジェニック技術エンハンサートラップユウレイボヤトランスボゾントランスポザーゼ GFPレポーター

项目摘要

カタユウレイボヤ並びにユウレイボヤにおいて、トランスジェニック・ホヤの作製並びに挿入変異体作製の技術を開発し、その技術を用いてホヤ初期胚において局在する母性mRNAの局在メカニズムを解明することを目的に研究を進めている。前年度同定したCi-Musashi遺伝子のエンハンサー領域の一つFr3についてその中のエレメントを詳しく解析し、エンハンサー活性にクリティカルな塩基配列を同定した。カタユウレイボヤと近縁のホヤであるユウレイボヤにおいても、Minosトランスポゾンが活性をもつことを示した。Minosトランスポゾン挿入を持ったトランスジェニックラインを従来の顕微注入法よりも簡単に作製する手法を開発するため、エレクトロポレーション法によるトランスジェニックライン作製を試み、この方法でもトランスジェニックラインが高効率に作製できることを突き止めた。カタユウレイボヤMinosトランスポゾン挿入変異体を単離する目的で、改変型Minosトランスポゾンを作製し、トランスポゾン挿入をゲノムに導入されたトランスジェニックラインを約180作製し、そのうちの120のラインをスクリーニングした。その結果、4つのMinosの挿入により引き起こされた可能性がある突然変異体を得た。その突然変異体の一つはホヤの変態イベントの突然変異体であり、swimming juvenilieと名付けた。この突然変異体について詳しく解析し、確かにMinosの挿入によって生じた突然変異体であること、原因遺伝子はセルロース合成酵素遺伝子Ci-CesAであることを同定した。swimming juvenile突然変異体の解析に関連して、カタユウレイボヤの幼生期並びに変態期におけるDNA複製のパターンを調べ、3種類の胚葉がそれぞれ独自のタイミングでDNA複製を行うこと、ホヤの変態にはDNA複製を必要としないイベントと必要とするイベントの二種類が存在していることを突き止めた。以上のことより(カタ)ユウレイボヤにおいてトランスジェニックラインを作製し、また突然変異体を単離する手法を確立した。

In the early stages of the development of technology and technology, the Department of Embryology is responsible for the study of maternal mRNA in the Department of Maternal Medicine. In the previous year, it was the same as that in the previous year. In the previous year, it was the same as the previous year. In the previous year, it was the same as that in the field of Fr3. In the previous year, it was the same as that in the previous year. I don't know what to do. I don't know. I don't know. In the Minos system, there is a significant increase in the number of errors in the system. The microinjection method is used to determine the accuracy of the method. The method is used to determine the accuracy of the method. The method is used to determine the accuracy of the method. Please tell me that you are not interested in the purpose, the modified Minosystem, the Minos, and so on, so that you can learn the truth. The results show that the 4-minute Minos entry leads to a sudden increase in the likelihood of failure. All of a sudden, all of a sudden, I don't know what to do. I don't know what to do. All of a sudden, I don't know what to do. I don't know what to do. All of a sudden, all of a sudden, I don't know what to do. I don't know what to do. I don't know if I'm going to pay for it all of a sudden. I don't know if I'm going to swimming juvenilie you. All of a sudden, you need to make sure that you have a problem with Minos, and that you need to know that the reason is that you have a problem with the synthesis of enzymes, which is the same as that of Ci-CesA. Swimming juvenile unexpectedly analyzed DNA replication in the early stage and in the early stage. In this case, it is necessary to make a copy of the DNA replication file alone. The above information is required to make sure that all of a sudden, the body is separated from the body, and the method is confirmed.