クライオ電子顕微鏡法によるセルロース合成酵素の立体構造解析

使用冷冻电子显微镜对纤维素合酶进行三维结构分析

基本信息

  • 批准号:
    02J01006
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.3万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2002
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2002 至 2004
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

1.本研究課題の目的は、セルロース合成酵素の機能をその構造から明らかにすることにある。電子顕微鏡による単粒子構造解析を目指して、酢酸菌からセルロース合成酵素の単離精製実験を既報に従い行ってきたが、成功していない。そこで異種発現系の構築を目指してセルロース合成酵素オペロンのクローニングを行うべく、プライマー設計まで行った。また合成酵素の単離を生化学的に追跡する手段がないため、ポリクロ抗体の作製を外注にて行っている。セルロース合成酵素(BcsA遺伝子産物)そのものに加えて、同一オペロンに存在するBcsC遺伝子産物の追跡を開始すべく、これに対する抗体も作製依頼中である。2.セルロースも含めて多糖分子の合成酵素を考える際に、糖転移反応に関する酵素学的な視点は大きく取り上げられてきたが、ミクロフィブリルなどの高次構造を形成する機構の具体的な認識が乏しいという問題点を、多糖の合成例の比較から指摘した(第6回理研シンポジウム「高分子結晶の構造と機能」において発表)。3.二次元結晶化によるタンパク構造解析は、膜タンパクの構造解析として非常に有用であることが示されつつある。しかしX線結晶解析用の三次元結晶と対照的に、二次元結晶作製の方法論は確立されたものではない。将来的にセルロース合成酵素の高分解能解析のためには必須であろう二次元結晶解析を見据え、あるバクテリア由来の膜タンパク質を用いて二次元結晶化の方法論の確立を目指して実験を開始した。現在まで、脂質二重層内に再構成された構造物をコンスタントに得られるようになったが、まだ結晶性が弱く解析に値するものは得られていない。それでも精製・結晶化の間に静電作用を抑える戦略が重要であることが分かりつつある。
1. The objective of this research project is to にする, セ, ロ, ロ, ス, synthesize enzyme functions をそ, structure をそ, ら, ら, ら, にする, にする, とにある. Electronic 顕 micromirror に よ る 単 particle structure を refers し て, boggy acid bacteria か ら セ ル ロ ー ス synthetic enzyme の 単 from refined be 験 を at both に 従 い line っ て き た が, successful し て い な い. そ こ で heterogeneous 発 now is の build を refers し て セ ル ロ ー ス synthetic enzyme オ ペ ロ ン の ク ロ ー ニ ン グ を line う べ く, プ ラ イ マ ー design ま で line っ た. ま た synthetic enzyme の 単 from を biochemistry に tracing す る means が な い た め, ポ リ ク ロ を outside the antibody の cropping note に て line っ て い る. セ ル ロ ー ス synthetase (BcsA heritage 伝 zi chan) そ の も の に plus え て, same オ ペ ロ ン に exist す る BcsC heritage 伝 zi chan content の tracing を began す べ く, こ れ に す seaborne る 頼 in the antibody も cropping で あ る. Contains 2. セ ル ロ ー ス も め て polysaccharide molecules の synthetic enzyme を exam え る interstate に, planning to move the sugar 応 に masato す る enzymes studied な viewpoints は big き く take on り げ ら れ て き た が, ミ ク ロ フ ィ ブ リ ル な ど の high times tectonic を す る institutions の specific な know が spent し い と い う を problems point, polysaccharide の synthetic example の is か ら blame し た (6 riken back Youdaoplaceholder0 ポジウム ポジウム "polymer crystalline <s:1> structure と function" にお て て published. 3. The two dimensional crystallization に よ る タ ン パ ク analytical は, membrane structure タ ン パ ク の structure と し て very useful に で あ る こ と が shown さ れ つ つ あ る. The X-ray crystallization analysis of the <s:1> three-dimensional crystallization と is based on the に and the <s:1> methodology of two-dimensional crystallization production <e:1>, which establishes the された, <s:1>, で, and な な. Future に セ ル ロ ー ス synthetic enzyme の high decomposition can parse の た め に は must で あ ろ う を according to え, of the secondary yuan crystallization あ る バ ク テ リ ア origin の membrane タ ン パ ク qualitative を with い て secondary yuan crystallization の の methodology established を refers し て be 験 を began し た. Now ま で, lipid bilayer に reconstitution さ れ た structure を コ ン ス タ ン ト に have ら れ る よ う に な っ た が, ま だ crystalline が weak く parsing に numerical す る も の は have ら れ て い な い. The に electrostatic interaction between それで <s:1> refining and crystallization を を suppression of える is slightly が important である とが とが is responsible for である ある ある ある ある ある ある ある.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
T.Imai, T.Watanabe, T.Yui, J.Sugiyama: "The directionality of chitin biosynthesis - A revisit."Biochemical Journal. Vol.374,part3. 755-760 (2003)
T.Imai、T.Watanabe、T.Yui、J.Sugiyama:“几丁质生物合成的方向性 - 重新审视。”生物化学杂志。
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  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
高次構造に垣間見るβ-グルカン類の構造形成
高阶结构中β-葡聚糖的结构形成
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今井 友也其他文献

炭素イオンビームによる寄生植物アメリカネナシカズラの変異体ライブラリ作製と吸器形成に関連する変異体スクリーニング法の開発
利用碳离子束创建寄生植物 Aphrica annuus 突变体库并开发与吸器形成相关的突变体筛选方法
  • DOI:
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    近藤 辰哉;鹿島 騰真;中村 結衣;野島 慎吾;姚閔;今井 友也;横山隆亮,加賀悠樹,篠原直貴,西谷和彦,佐藤勝也,大野 豊
  • 通讯作者:
    横山隆亮,加賀悠樹,篠原直貴,西谷和彦,佐藤勝也,大野 豊
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使用重组纤维素合酶进行体外纤维素合成?
  • DOI:
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    今井 友也;Paavo A. Penttila;田島寛隆;山本郷湖;湯口宜明;Kenji Tajima
  • 通讯作者:
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
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    0
  • 作者:
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  • 通讯作者:
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    横山 文秋;川本 純;今井 友也;小川 拓哉;栗原 達夫
  • 通讯作者:
    栗原 達夫
過剰エントロピー生成を用いたRNNの学習則
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    横山 文秋;川本 純;陳 晨;今井 友也;栗原 達夫;山本峻平,金子邦彦;山本峻平,金子邦彦
  • 通讯作者:
    山本峻平,金子邦彦

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天然セルロースの新しいミクロフィブリルモデルの構築
新型天然纤维素微纤维模型的构建
  • 批准号:
    97J03190
  • 财政年份:
    1998
  • 资助金额:
    $ 2.3万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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