权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

クライオ電子顕微鏡法によるセルロース合成酵素の立体構造解析

使用冷冻电子显微镜对纤维素合酶进行三维结构分析

基本信息

批准号：
02J01006
负责人：
今井友也
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1.本研究課題の目的は、セルロース合成酵素の機能をその構造から明らかにすることにある。電子顕微鏡による単粒子構造解析を目指して、酢酸菌からセルロース合成酵素の単離精製実験を既報に従い行ってきたが、成功していない。そこで異種発現系の構築を目指してセルロース合成酵素オペロンのクローニングを行うべく、プライマー設計まで行った。また合成酵素の単離を生化学的に追跡する手段がないため、ポリクロ抗体の作製を外注にて行っている。セルロース合成酵素(BcsA遺伝子産物)そのものに加えて、同一オペロンに存在するBcsC遺伝子産物の追跡を開始すべく、これに対する抗体も作製依頼中である。2.セルロースも含めて多糖分子の合成酵素を考える際に、糖転移反応に関する酵素学的な視点は大きく取り上げられてきたが、ミクロフィブリルなどの高次構造を形成する機構の具体的な認識が乏しいという問題点を、多糖の合成例の比較から指摘した(第6回理研シンポジウム「高分子結晶の構造と機能」において発表)。3.二次元結晶化によるタンパク構造解析は、膜タンパクの構造解析として非常に有用であることが示されつつある。しかしX線結晶解析用の三次元結晶と対照的に、二次元結晶作製の方法論は確立されたものではない。将来的にセルロース合成酵素の高分解能解析のためには必須であろう二次元結晶解析を見据え、あるバクテリア由来の膜タンパク質を用いて二次元結晶化の方法論の確立を目指して実験を開始した。現在まで、脂質二重層内に再構成された構造物をコンスタントに得られるようになったが、まだ結晶性が弱く解析に値するものは得られていない。それでも精製・結晶化の間に静電作用を抑える戦略が重要であることが分かりつつある。

1. In this study, the purpose of this study is to improve the ability of the synthetic enzyme mechanism. The synthesis of enzymes from microorganisms and oxalic acid bacteria were analyzed by electron microarray, and the synthetic enzymes were isolated from each other. All kinds of equipment are used to determine the level of synthetic enzymes, enzymes. The synthetic enzymes are isolated from the biochemical methods of biochemistry, and the antibodies are used for external injection. The synthetic enzyme (BcsA spool) is used to increase the content of the enzyme, the BcsC enzyme is present in the same enzyme, and the antibody is used to detect the antibody in the process. two。 There are many factors in the synthesis of enzymes such as polysaccharides, polysaccharides, enzymes, enzymes and enzymes. The synthesis of polysaccharides is more important than that of polysaccharides. (the sixth chapter is to study the mechanical properties of polymers. 3. The crystallization of the two-dimensional structure is very useful for the analysis of the two-dimensional structure, the fabrication of the membrane and the analysis of the film. The X-ray crystal analysis is made by using the three-dimensional crystal and the second-dimensional crystal as the method to make sure that the temperature is correct. In the future, it is necessary to analyze the high resolution of synthetic enzymes in the future. it is necessary to analyze the data of the two-dimensional structure, the origin of the temperature field, the use of the crystallization method of the two-dimensional crystallization method to determine the starting point of the temperature field. Now, in the double layers of fat and fat, there is an increase in the quality of the creation. the results show that the structure is weak, and the crystal structure is weak. The results of the crystallization test show that the static effect is very important and that it is important to separate the data.