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初期リンパ球におけるTCRγ遺伝子座のaccessibility調節機構

早期淋巴细胞TCRγ位点的可达性调节机制

基本信息

批准号：
02J01489
负责人：
李海天
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

リンパ球抗原受容体遺伝子は分化段階特異的にV(D)J組換えをおこすが、これはクロマチンの開閉状態により制御されている。我々は、インターロイキン7レセプターにより活性化されたStat5が、TCRγ遺伝子座に転写共役因子をリクルートし、ピストンのアセチル化により転写とDNA組換えを誘導することを示した。最近、ピストンH3 Lys9のメチル化が種々の遺伝子座のサイレンシングを誘導することが報告されているので、TCRγ遺伝子座が閉じた状態とピストンのメチル化との関連について解析した。BaF3/pim-1細胞ではIL-3刺激によりTCRγ遺伝子座においてヒストンのアセチル化が誘導される。この実験系を用いて、サイトカイン刺激後のTCRγ遺伝子座全域のピストン修飾の経時的な変化を、抗アセチル化ピストンH3 Lys9抗体と抗メチル化ピストンH3 Lys9抗体を用いて、クロマチン免疫沈降法にて解析した。その結果、サイトカイン非刺激の状態でJγ germlineプロモーター、エンハンサー領域、HsA領域(V領域の中に存在する調節領域)が高レベルでメチル化されていたが、刺激後数日間でそのメチル化レベルが徐々に低下し、代わりにアセチル化レベルが上昇した。この時、Jγ領域のgermline転写の誘導をノザン法で、クロマチンの開閉状態を制限酵素accessibility法にて解析すると、サイトカイン刺激後数日間をかけて転写とaccessibilityが徐々に上昇した。一方、Cγ遺伝子においては、ピストン修飾のこのような変化は見られなかった。以上の結果から、TCRγ遺伝子座におけるピストンH3 Lys9の修飾は調節領域に特異的に誘導され、クロマチンの閉じた状態とピストンH3 Lys9のメチル化が良く相関することが示された。一方、ピストンH3 Lys9のアセチル化とクロマチンの開いた状態が良く相関することが示された。

The antigen receptor gene of the mouse is divided into two groups: V (D) and J. We have the ability to activate Stat 5 and TCR γ gene loci, and we have the ability to activate DNA sequences. Recently, TCR γ gene loci have been reported to be closed state and analyzed in relation to H3 Lys 9 gene loci. BaF3/pim-1 cells were induced by IL-3 stimulation in the TCR γ locus. This study was performed by using the TCR γ gene locus domain modification method after stimulation, and the anti-TCR γ gene locus H3Lys9 antibody was analyzed by using the anti-TCR γ gene locus H3Lys9 antibody. The results of these tests are as follows: 1. In the non-stimulation state, the J γ germline is high, the V domain is high, the number of days after stimulation is low, and the number of days after stimulation is high. At this time, the induction of germline writing in the J γ field is analyzed by the enzyme accessibility method, and the opening and closing state of switches is analyzed by the enzyme accessibility method. Writing and accessibility are gradually increasing during the day after the support card stimulation. A party, C γThe above results show that the modification of TCR γ gene loci is specific to the regulatory domain, and the modification of TCR γ gene loci is related to the regulatory domain. A party, H3 Lys 9, is in good condition.