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cDNAアレイ法を用いた真核型無機炭素輸送体遺伝子の単離と機能解析

cDNA芯片法分离真核无机碳转运蛋白基因并进行功能分析

基本信息

批准号：
02J02040
负责人：
小日向務
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)CO_2応答に必須な調節因子CCM1について、亜鉛フィンガー候補領域に亜鉛を結合しているかを明らかにするため、この領域をGST融合タンパク質として大腸菌で発現させて精製した。亜鉛の定量を行なったところ、亜鉛フィンガー領域とは約1:1の割合で亜鉛が結合していた。さらに、亜鉛フィンガードメインに含まれるAsp-60残基がCCM1の機能に必須であるかどうかを検証するため、これをHis、Cys、Valにそれぞれ置換した株を作出したところ、いずれの形質転換株もCO_2欠乏条件下で野生型と同様に生育したことから、Asp-60以外の残基に亜鉛が結合していることが推定された。一方、カルボキシ末端の54アミノ酸残基を欠損するとCO_2欠乏による転写誘導が起こらなかったので、この領域は転写誘導に必須であることが明確になった。(2)抗CCM1抗体を作成して、ウェスタン解析を行なったところ、クラミドモナスの可溶性画分に、約95kDaのタンパク質を検出した。CCM1タンパク質の推定分子量は70,073であるので、CCM1はin vivoで何らかの修飾を受けていることが示唆された。さらに、CCM1タンパク質はCO_2濃度に関わりなく構成的に発現しており、細胞内では高分子複合体を形成していると推定された。(3)無機炭素輸送体の実体については複数の候補遺伝子についてRNAi法による機能解析を更に進める予定である。

(1) the CO_2 response must be based on the factors such as CCM1 response, real-time response, real-time response in the field of communication, and the integration of GST in the field to detect the accuracy of the bacteria. We need to make a quantitative analysis of the number of people in the field at about 1:1. It is necessary to detect the presence of Asp-60 residues in the CCM1 mechanism and to induce the growth of wild-type plants under the condition of lack of CO _ 2 in the presence of carbon dioxide deficiency. Residues other than Asp-60 are presumed to be affected by the combination of residues and antigens. On the one hand, there is a shortage of acid residues at the end of the system. There is a lack of CO _ 2 writing guides. You must make sure that you can clearly verify that the domain writing instructions are not valid. (2) the anti-CCM1 antibody was made and analyzed in this paper. The results showed that the anti-CCM1 antibody was not soluble, and that the anti-95kDa antibody was purified. The molecular weight of CCM1 is presumed to be 70073, and the molecular weight of CCM1, in vivo, and so on is instigated. In the presence of carbon dioxide (CO _ 2), the formation of a complex of polymers in the cells and the formation of a presumptive complex of polymers in the cells, the effects of CO _ 2 and CCM1 on the formation of the complex were studied. (3) the system of carbon transporters can be analyzed by RNAi method.