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液胞膜の輸送体タンパク質の特定と果実液胞への物質蓄積での役割

液泡膜转运蛋白的鉴定及其在果实液泡物质积累中的作用

基本信息

批准号：
02J05633
负责人：
気多澄江
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

果実において糖は品質を左右する要因である。糖は主に細胞内の液胞に蓄積される。濃度勾配に逆らって液胞へ糖を高濃度に蓄積するには、液胞膜に存在する糖輸送体の働きが重要であるが、まだ分子の特定には至っていない。近年、植物では初めて液胞膜局在のミオイノシトール(糖アルコール)輸送体ホモログが単離された(Chauhan, et al.,2000)。本研究では果実における液胞膜の糖輸送体の特定を目指し、この配列をもとにセイヨウナシ果実からホモログ全長cDNA(PcITR1)を単離した。PcITR1は糖輸送体に特徴的な構造を持つが、ミオイノシトール輸送体ホモログと最も相同性が高かった。PcITR1の細胞内局在を明らかにするために、PcITR1とGFPの融合タンパク質を35Sプロモーターを用いシロイヌナズナの培養細胞で一過的に発現させた。その結果、予想とは反し液胞膜ではなく細胞膜に融合タンパク質の蛍光を確認した。またPcITR1の糖輸送活性を調べるために、酵母を用いた異種発現系での機能解析を試みた。PcITR1のタンパク質コード領域を発現ベクターに組み込み、出芽酵母に導入し発現誘導させたが、明確な糖輸送活性は検出できなかった。さらにmRNAの発現部位を調べるために半定量的RT-PCRを行ったところ、PcITR1は花、種子および果実で発現が高く、葉では発現が低いことが明らかとなった。

The quality of sugar depends on its quality. Sugar accumulation in vacuoles of host cells. The concentration of sugar in the cell is high, and the presence of sugar transporter in the cell membrane is important. In recent years, the plant has been in the early stages of the development of a cellular membrane system.(Chauhan, et al., 2000)。In this study, we isolated the full-length cDNA(PcITR1) of the glucose transporter from the plasma membrane. PcITR1 has a high similarity to the structure of the sugar transporter. PcITR1 is present in the cellular environment, and PcITR1 and GFP fusion proteins are present in cultured cells. The result is that the cell membrane is fused and the light from the cell membrane is confirmed Functional analysis of PcITR1 gene expression system for regulating its sugar transport activity PcITR1 protein domain development, budding yeast introduction, induction, and specific sugar transport activity A semi-quantitative RT-PCR was performed to detect the expression of PcITR1 mRNA in flower, seed and fruit.