パルス波レーザー光を利用した遺伝子導入法の開発

使用脉冲波激光的基因转移方法的开发

• 批准号: 02J06402
• 负责人: 梅林 志浩
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology (2004)Japan Advanced Institute of Science and Technology (2002-2003)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J06402/
• 关键词: 遺伝子導入; パルス波レーザー光; マイクロビーズ; Drug Delivery System(DDS); 遺伝子治療; Drug Delivery System (DDS)

遺伝子治療を行う上で最も重要な基本技術は遺伝子の導入法である。治療用遺伝子を細胞内へ安全かつ効率的に導入するためには、既存の導入技術の改良と同時に従来技術の欠点を補う新規の遺伝子導入技術の開発が必要になる。これまでの研究で、マイクロビーズ(Polystyrene Latex)と細胞の混合液にパルス波レーザー光を照射すると、細胞膜透過性が上昇し、細胞内への物質導入が可能になることを明らかにしている。本研究ではマイクロビーズとパルス波レーザー光を利用した新規遺伝子導入法を確立するため、(1)マイクロビーズ、レーザーおよび細胞の種類の検討(2)本法による膜透過性上昇機序および遺伝子導入機構の検討を行った。大きさの異なるマイクロビーズ(1〜3μm)を使用して、FITC標識デキストラン(M.W.70,000〜5,000,000)を細胞に導入した結果、導入分子の大きさはビーズの大きさに依存することが明らかになった。その際のviabilityの低下はみられなかった。細胞の種類に関しては、浮遊細胞であるマウス繊維肉腫細胞(Meth-A)と、付着細胞のヒト繊維芽細胞(Fibroblast)を比較した。Meth-Aでは死細胞が比較的多く見られたのに対し、Fibroblastでは殆ど観察されなかった。この結果から、本法による遺伝子導入は、付着性の細胞に対して有効であるといえる。レーザー光として連続波レーザーを用いた場合には上記の結果は得られないことから、パルス波レーザーに特有の現象(応力波による細胞膜の破壊)により、遺伝子が細胞内に導入されると考えられる。

The most important basic technique for the treatment of left-behinds is the introduction method of left-behinds. Therapeutic use of intracellular intracellular drugs is safe and efficient, and the existing introduction technology is improved and at the same time it is necessary to make up for the shortcomings of the technology and make up for the new regulations. Polystyrene Latex) and cell mixture are irradiated with light and the cell membrane is permeabilized It is possible to increase the rate of transient growth and the introduction of intracellular substances into the cells. In this study, the new rules and regulations were used to introduce the new rules and regulations to establish the new rules and regulations.ーズ, レーザーおよび types of cells の検 Discussion (2) This method is a membrane permeability riser sequence お よ び 缝子 introductory mechanism の検 Discussion を row っ た. Large きさのなるマイクロビーズ(1～3μm)をUse して, FITC mark デキストラン(M.W.70,000~5 ,000,000)をThe result of the introduction of the cells and the introduction of the molecules are the large dependence of the molecules.その界のviabilityのlow はみられなかった. The types of cells include: planktonic cells, Meth-A cells, and Fibroblast cells. Meth-AではDead CellがComparison of manyく见られたのに対し, Fibroblastでは殆ど観超碰されなかった. The result of this method is that the method is effective when the remaining cells are introduced and the attached cells are effective.レーザー光として连続波レーザーを用いたoccasionには上记の resultsは得られないことから、パルス波レーThe unique phenomenon of ザーに (濜力波による恮棊) of the cell membrane) により, and the remaining そ子がに is introduced into the cell and されると卡えられる.

项目成果

Yukihiro Umebayashi: "Elevation of plasma membrane permeability on laser irradiation of extracellular latex particles"The Journal of Biochemistry. 134・2. 219-224 (2003)

Yukihiro Umebayashi：“细胞外乳胶颗粒的激光照射导致质膜渗透性的升高”《生物化学杂志》134・2（2003）。