RNAポリメラーゼIIの転写伸長反応を抑制するNELF複合体の機能解析

抑制RNA聚合酶II转录延伸反应的NELF复合物的功能分析

• 批准号: 02J06707
• 负责人: 成田 央
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J06707/
• 关键词: 転写伸長反応; RNAポリメーゼII; RNA干渉; 転写伸長因子; 転写反応; RNAポリメラーゼII; mRNAプロセシング; RNAi法

真核生物の転写反応は、遺伝子発現の制御の要として多くの研究者の注目を集めてきた。転写反応は開始・伸長・終結の三段階に分類できるが、近年になって転写反応の制御が、開始段階だけでなく伸長段階においても行われていることが分かってきた。このような背景からこれまでに幾つかの転写伸長因子が同定されたが、それらは全て伸長反応を促進するものであった。我々が精製・同定に成功した転写伸長因子NELFは、伸長反応を負に制御する新しいカテゴリーの因子である。NELFの転写伸長反応における作用機序については詳細に解析されている一方で、NELFの細胞内での役割や転写伸長制御以外の機能といった点についてはよく分かっていない。そこで本研究では、NELFの細胞内での機能を解析することを目的とした。この目的のため、本研究では細胞内に存在するNELFを含むタンパク質複合体に注目した。そして解析の方法として、(1)細胞内在性NELFのノックダウン、(2)NELFに相互作用する因子の探索、という2種類のアプローチを行った。以下にその結果を示す。(1)HeLa細胞においてRNAi法を用いて安定的にNELFをノックダウンすることに成功した。NELFをノックダウンした細胞はコントロールの細胞と比較して増殖が遅くなるという表現型が観察された。現在は、この表現型がどのように引き起こされるかについて解析を行っている。(2)Flagタグ付きのNELFを恒常的に発現するHeLa細胞株を樹立した。この細胞の核抽出液を調製し、免疫沈降法を用いてNELFに相互作用する因子を精製した。質量分析計による解析の結果、RNAポリメラーゼII等これまでにNELFに相互作用することが分かっているもの以外に、いくつかのNELF相互作用因子の候補を同定することができた。現在は、これらの因子とNELFの結合の特異性を検討し、その相互作用の意義を解析している。

In eukaryotes, it is necessary for researchers to pay close attention to the control of eukaryotes. In recent years, we have started to expand the three sections of the railway, and in recent years, we have been writing about the control and control of the reactions. in recent years, we have been writing about the control and control of the reactions. in recent years, we have been writing about the beginning of the reactions. in recent years, we have been writing about the beginning of the reactions. in recent years, we have been writing about the control and control of the reactions. in recent years, we have been writing about the beginning of the reform. In the background, the growth factor is the same as that of the system, and the overall growth of the system promotes the growth of the system. We have determined that we can successfully write the NELF factor and increase the growth factor to control the new growth factor. The NELF machine is used to analyze the mechanism of the reaction system, and the NELF machine is capable of controlling the growth of the machine outside of the control system. The purpose of this study was to analyze the purpose of this study by means of intracellular enzyme analysis and NELF assay. The purpose of this study is to investigate the existence of intracellular NELF in the presence of syncytial attention. The methods of analysis, (1) intracellular NELF interaction, (2) the exploration of NELF interaction factors, and so on. The following results show the results. (1) the HeLa cell cycle RNAi method was used to determine the success of the NELF method. NELF

项目成果

Y.Yamaguchi et al.: "Evidence that negative elongation factor represses transcription elongatgion through binding to a DRB sensitivity-inducing factor/RNA polymerase II complex and RNA"Mol.Cell.Biol.. 22. 2918-2927 (2002)

Y.Yamaguchi 等人：“负延伸因子通过与 DRB 敏感性诱导因子/RNA 聚合酶 II 复合物和 RNA 结合来抑制转录延伸的证据”Mol.Cell.Biol.. 22. 2918-2927 (2002)

T.Narita et al.: "Human transcription elongation factor NELF : Identification of novel subunits and reconstitution of functionally active complex."Mol.Cell.Biol.. 23. 1863-1873 (2003)

T.Narita 等人：“人类转录延伸因子 NELF：新亚基的鉴定和功能活性复合物的重建。”Mol.Cell.Biol.. 23. 1863-1873 (2003)

J.Hasegawa et al.: "A rapid purification method for human RNA polymerase II by two-step affinity chromatography"J.Biochem.. 133. 133-138 (2003)

J.Hasekawa等：“通过两步亲和层析快速纯化人RNA聚合酶II的方法”J.Biochem.. 133. 133-138 (2003)