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脂質代謝を制御する転写因子SREBPの細胞内動態の解析

控制脂质代谢的转录因子SREBP的细胞内动力学分析

基本信息

批准号：
02J07605
负责人：
平野祐子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research (2003)The University of Tokyo (2002)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J07605/
关键词：
SREBP 翻訳後修飾ユビキチン化 SUMO-1化 ubiquitin proteasome degradation SUMO-1

项目摘要

転写調節因子SREBPのユビキチン化とSUMO-1化について解析した。ユビキチン化はE1、E2、E3の三種の酵素により基質に付加されるが、基質認識を担う意味で最も重要なE3の同定を目標に研究を行った。細胞に各種E3因子を発現させ、抗体を用いて相互作用を検討したところ、SCF型E3複合体がユビキチン化に関わることを示唆する結果を得た。SCF型E3複合体は、数種類の因子により構成されており、基質認識因子を交換して多種の基質をユビキチン化する。そこで、SCF型E3複合体に含まれるSREBPの認識に関わる因子を単離する目的で、Yeast two hybridと、細胞を用いたGST pull downによるタンパク質の探索を行っている。現在、活性型SREBPと共沈したタンパク質をMS解析にかけており、分解機構の詳細が明らかになることが期待される。活性型SREBPはSUMO(Small ubiqutin-like modifer)-1化修飾を受け、そのSUMO-1化はその転写活性を抑制することを明らかにし、論文とした(Yuko Hirano et al.(2003)J.Biol.Chem,278,16809-16819.)。次の課題として、SUMO-1化のE3と脱SUMO-1酵素の同定を試みた。組換えたんぱく質を用いたSUMO-1化の実験の結果、これまでにSUMO-1化に関わることがいくつかの基質で明らかなPIASとRanBP2が活性型SREBPのSUMO-1化を亢進することを同定した。RanBP2は核膜孔複合体の構成因子であり、活性型SREBPは核膜孔または核内においてSUMO-1化される可能性がある。一方、SUMO-1の解離に機能する脱SUMO-1化酵素は、その発現には組織特異性があり、組織により特異的なアイソフォームが存在し、また異なる細胞内局在性を示すことが報告されていることから、これらの酵素は基質特異的な調節に関わる可能性がある。そこで、現在これまでに知られている7種の脱SUMO-1化酵素の組換えたんぱく質を作成し、SREBPのSUMO-1化の調節に関わるかについて検討中である。

The regulatory factor SREBP is analyzed and analyzed in the form of SUMO-1.ユビキチンはE1, E2, and E3 are three kinds of enzymes, and the substrate is added and the substrate is understood. The meaning is the most important, and the research on the target of E3 is the same. Various E3 factors are present in cells, and antibodies are used to interact with each other. , SCF-type E3 complex has been transformed into a new type of complex. The SCF-type E3 complex is composed of several types of factors, and the matrix recognition factor is exchanged for various types of matrix.そこで、SCF type E3 complex にcontaining まれるSREBP のcognition に Off わるfactor を単leave するpurpose で、Yeast two hybrid と、cell をいたGST pull downによるタンパク性のExplorationを行っている. Currently, the active type SREBP is co-precipitated and the MS analysis is done, and the decomposition mechanism is detailed and is looking forward to. Active SREBP はSUMO (Small ubiqutin-like modifer)-1 chemical modification をReceive け, そのSUMO-1 chemical はその転 write active を inhibit することを明らかにし, paper とした(Yuko Hirano et al. al. (2003) J. Biol. Chem, 278, 16809-16819.). The next topic is the test of the same determination of the SUMO-1 enzyme E3 and the removal of SUMO-1 enzyme. The result of group replacement of えたんぱくqualityをwith いたSUMO-1 to change の実験の, これまでにSUMO-1 to change に关わることがいくつかThe substrate is clear and the PIAS is the active type of SREBP and the SUMO-1 is active. RanBP2 is a constituent factor of the nuclear membrane pore complex, and the active SREBP is a nuclear membrane pore complex and a possibility of SUMO-1 transformation within the nucleus. On the one hand, SUMO-1 dissociation function, SUMO-1-depleting enzyme, tissue specificity, and tissue specificity.がExistenceし、またdifferentなる Intracellular locality をshow すことがreport されているこThere is a possibility of とから, これらのenzyme and substrate-specific な adjustment に switch わる.そこで、Now これまでにknows られている7 kinds of のSUMO-1 enzyme のcombination replacement えたんぱくQuality is made, SREBP's SUMO-1 is adjusted and adjusted, and it is closed and adjusted.