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転写因子としてのポリADPリボース合成酵素(PARP)の役割の解明

阐明聚 ADP 核糖合酶 (PARP) 作为转录因子的作用

基本信息

批准号：
02J10306
负责人：
秋山貴子
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

研究代表者は、インスリン産生細胞再生増殖因子であるRegの発現はReg遺伝子の転写誘導によること、またその転写誘導は、ポリADPリボース合成酵素(PARP)が転写因子としてReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列に特異的に結合し、その他複数の因子をリクルートし転写複合体を形成することで引き起こされることを明らかにした。そこで本研究ではPARPが転写因子として機能する際にPARP蛋白のどのドメインがReg遺伝子プロモーター領域に特異的に結合して機能しているのかを明らかにすることで、転写因子としてのPARPによる遺伝子発現機構を解明する。平成16年度の研究は以下のように進行した。1.前年度にリコンビナントPARP、野生型(558 unit/mg,711μg)、HAタグ付野生型(570 unit/mg,621μg)、zinc figer motif変異型(154 unit/mg,190μg)を得た。これらの精製蛋白質等を用いて、Electromobility Shift Assay(EMSA法)で、Reg promoter領域への配列特異的結合を検討した。2.野生型PARPはラットReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列に特異的に結合した。DNA probeに一塩基ずつ変異を導入したcold competitorを用いてEMSA法を行い、PARPの結合認識配列を検討したところ、GC box類似の配列5'-TGCCCTCCCAT-3'において下線で示す塩基がPARPの結合に必須の塩基配列であることを明らかになった。また、この配列はラット、マウス、ヒトのReg遺伝子プロモーター領域においてよく保存されていた。3.zinc finger motif変異型PARPはReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列に対して結合活性を示したが、結合に上述の配列特異性が失われていた。野生型PARPにおける配列特異的な結合にzinc finger motifが関与していることが示された。

Research representatives have shown that the expression of Reg gene, Reg gene, Reg In this study, PARP was found to be a transcription factor and a functional domain specific binding agent for PARP protein, and to have a functional domain specific binding agent for PARP protein. The following research was conducted in Heisei 16. 1. In the previous year, PARP, wild type (558 unit/mg,711μg), HA, wild type (570 unit/mg,621μg), zinc figer motif variant (154 unit/mg,190μg) were obtained. The purified proteins were examined by Electromobility Shift Assay(EMSA) and by sequence-specific binding in the Reg promoter domain. 2. Wild-type PARP has a specific binding to its GC box. DNA probe is a base element that is different from the cold competitor. EMSA method is used. PARP binding recognition is discussed. GC box is similar to 5'-TGCCCTCCCAT-3'. The lower line shows that PARP binding must be based on the base element. This is the first time that we've had a chance to save money. 3. ZINC FINGER MOTIF DIFFERENT PARP REG REG Wild-type PARP has been shown to bind to zinc finger motifs specifically.