カイコ細胞におけるウイルス特異的認識タンパク質の同定

蚕细胞中病毒特异性识别蛋白的鉴定

• 批准号: 02J20026
• 负责人: 津田 英利
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: National Institute of Agrobiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J20026/
• 关键词: カイコ; 濃核病ウイルス; DNV; レセプター; PCR; 培養細胞; ウエストウエスタン法; west western; ウイルス; ウイルスレセプター; 組み換えタンパク質

カイコに感染するウイルスの中で唯一非感受性品種が確立されている濃核病ウイルス(DNV)のキャプシドタンパク質に反応する宿主因子の検索を目的とした。DNVには2種類が知られており、DNV-1とDNV-2と分類されている。これらウイルスはカイコの中腸円筒細胞のみで増殖し、他の細胞や非感受性品種では全く感染増殖しないとされている。両方のキャプシドタンパク質をコードしている領域をクローニングして、GST融合タンパク質を作成した。これを元に中腸タンパク質に対するウエストウエスタンを行った結果、感受性品種と非感受性品種で違いが見られた。また感受性品種に感染させてもほとんど発病しない5齢では非感受性品種と同じ様なシグナルが得られた。またDNVの研究が進んでいない一つの原因に、感染可能な培養細胞系が確立されていない事が上げられるが、カイコ中腸で非感受性特異的に見られたシグナルが培養細胞にも見られるかどうかを数種類のカイコ培養細胞タンパク質を用いて調べた。その結果、非感受性と同様のシグナルを示す細胞系と、感受性品種に近いシグナルを示す細胞系とが見つかった。これら培養細胞にそれぞれのDNVを段階希釈して感染させ、感染後のウイルスDNAをPCRによって検出した結果、良く感染し、増殖するものとそうでないものがあることが解った。これらの事より、ウイルス構造タンパク質に親和性のある宿主タンパク質は存在するが、それは感染を促進すると言うよりもむしろ、感染を防御するような働きのあるタンパク質があるのではないかと考えられた。

The only non-susceptible variety in the infected population was established as a host factor for the detection of DNV and DNV. DNV-1, DNV-2 and DNV-2 are classified into two categories. The cells of the midgut of the virus are propagated, and the cells of other non-susceptible species are propagated. In addition, the GST-based fusion technology has been successfully developed. The results of the study were as follows: susceptible varieties and non-susceptible varieties. The susceptible variety is infected with the virus, and the non-susceptible variety is infected with the virus. The study of DNV has been carried out in a number of ways, including the establishment of a culture cell line, the possibility of infection, and the identification of non-susceptible cells. As a result, non-susceptible and identical cell lines were shown, and susceptible varieties were shown with similar cell lines. The DNA sequence of cultured cells is expected to be infected, and the DNA sequence after infection is expected to be detected. This is the first time that a person has ever been infected with a virus.