Cellular function analysis of a novel psoriatic pathogenesis gene, PTRF / Cavin-1, and its involvement in psoriatic pathology

新型银屑病发病基因PTRF/Cavin-1的细胞功能分析及其与银屑病病理学的关系

• 批准号: 20K08678
• 负责人: 津田 英利
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08678/
• 关键词: PTRF/Cavin1; SNPs; psoriasis; genome editing; 表皮細胞; 乾癬; ケラチノサイト; Psoriasis; PTRF/Cavin-1; 遺伝子機能解析

昨年度に引き続き、PTRF遺伝子のintron部における、rs963986C>Gの変異導入を試みた。細胞は、正常ヒト表皮細胞の確立した細胞株として広く用いられていいるHaCaT細胞を用いた。Cas9はタンパク質として、ガイドRNAと同時にトランスフェクションを行った。また変異導入用に作成した1本鎖DNAも同時にトランスフェクションを試みた。その後細胞を限界希釈し、96wellプレートに分注した。顕微鏡下で1-2細胞のwellを選び、その後ゲノムDNAが抽出可能になるまで、細胞を増殖した。十分増殖させた細胞は、回収し、ゲノムDNA抽出用と凍結保存用に分けた。DNAを抽出後、目的領域をPCRにて増幅し、サンガーシークエンスにてDNA配列を調べた。その結果、1-13塩基ほど欠損が見られた細胞株を得ることは出来たが、目的の1塩基変異を導入できた細胞株を得ることは出来なかった。最も欠失が少ない1塩基欠失の細胞株を用い、RNAを抽出後、PTRF遺伝子及び、ゲノム上その周辺に遺伝子がコードされている、STAT1、STAT3、STAT6等の発現量をqPCR法にて調べた。その結果、野生型HaCaTと比較して、大きく発現が変化している遺伝子は見られなかった。HaCaT細胞以外の皮膚由来の細胞についても変異の有無を調べることとした。自治医科大学皮膚科学講座にて確立された、表皮由来のDJM-1細胞について、rs963986の変異を持っているか否か、確認を行った。そうすると、rs963686と同じ一塩基多型を持っていることが解った。PCRで増幅した範囲内では、他の１塩基置換は見られなかった。そのため、今後のHaCaT細胞との比較に用いることにした。

Last year, に introduced に 続 に, PTRF derivative 伝 intron part における, rs963986C>G <s:1> variation into を test みた. Cell は, normal ヒ ト epidermal cells の establish し た cell lines と し て hiroo く with い ら れ て い い る HaCaT cells を using い た. Cas9 は タ ン パ ク qualitative と し て, ガ イ と ド RNA and に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン を line っ た. Youdaoplaceholder0 variant introduction: use に to make <s:1> た1 lock DNA に and simultaneously にトラ, スフェ, スフェ, ショ, を を test みた. Youdaoplaceholder0 <s:1> the posterior cell を the limit of the hilscht, 96wellプレ プレ トに the トに sub-note た. 顕 micro microscopically で 1-2 cell の well を び, そ の after ゲ ノ ム が DNA extraction could に な る ま で, cell を raised colonization し た. Fully proliferating させた cells, reproducing <s:1>, ゲノムDNA extraction by と, freezing and preservation by に minutes けた. を DNA extraction, target area after を PCR に て raised し, サ ン ガ ー シ ー ク エ ン ス に て DNA match column を adjustable べ た. そ の results, 1-13 salt base ほ ど owe loss が see ら れ た cell lines を have る こ と は out た が, 1 salt base - different purpose の を import で き た cell lines を must る こ と は out な か っ た. Most も owe less lost が な い 1 salt base owe の cell lines を loss, after using a pump, RNA を い PTRF heritage 伝 and び, ゲ ノ ム on そ の weeks 辺 に posthumous son 伝 が コ ー ド さ れ て い る, STAT1 and STAT3 and STAT6 の 発 now quantity を qPCR method に て adjustable べ た. そ の results, wild type HaCaT と compare し て, big き く 発 が now - the し て い る heritage 伝 は son see ら れ な か っ た. Outside of HaCaT cells, the cells of the source of <s:1> skin are に, に, て, て, <s:1>, there are を, べる, <s:1>, とと, た, た. Dermatology, autonomous medical university lecture に て establish さ れ た, epidermal origin の DJM - 1 cell に つ い て, rs963986 の - different を hold っ て い る か no か, confirm を っ た. Youdaoplaceholder0 and rs963686と hold the same solution as じ monosalt polymorphic を, って る ると が とが った った. PCRで amplituve で た within the range of 囲 で, and the <s:1> 1-baso displacement is seen in られな られな った った. Youdaoplaceholder0 そ ため, in the future, for the comparison of <s:1> HaCaT cells と そ, に should be used for に る とに とに とに た た.

项目成果

ACTA1変異を有し拡張型心筋症を呈した先天性筋線維不均等症の1例

ACTA1突变先天性肌纤维不对称合并扩张型心肌病一例

• 发表时间: 2021
• 作者: 松本 歩;津田 英利;古井 貞浩; 川田 雅子;安済 達也;関 満; 渡邊 和寿;西野 一三;小坂 仁; 岩本 禎彦;山形 崇倫
• 通讯作者: 山形 崇倫