植物抵抗性遺伝子の多様化機構の解明と進化工学的応用

植物抗性基因多样化机制的阐明及进化工程的应用

• 批准号: 02J20038
• 负责人: 池田 健一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: National Institute of Agrobiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J20038/
• 关键词: 分子進化工学; 植物抵抗性遺伝子; シャッフリング; いもち病; 進化分子工学; ユニットシャッフリング; Two-Hybrid法

前年度より引き続いて、植物抵抗性遺伝子Pibを出発点としたロイシンリッチリピートの反復単位を利用したシャッフリングライブラリーの質の向上に努めた。反復単位を重合化させる過程で少数のユニットしか重合しないものが含まれてくるのを防ぐために、ゲル回収方法やライゲーション・PCR反応時に添加するヌクレオチド濃度等の検討を行った。その結果、平均1kb、約10反復単位が重合したライブラリーが得られた。得られたライブラリーを用いて、イネいもち病菌の病原性に関わるハイドロフォービン遺伝子MPG1とイネ萎縮病ウイルスの外被タンパク構成成分である第8分節の二つの遺伝子断片をベイトとし、バクテリアTwo-Hybridシステムを用いて相互作用する遺伝子配列の選抜を行った。その結果、MPG1と相互作用する二つのクローンが見出された。このクローンの塩基配列を明らかにしたところ、同じ配列であることが明らかとなり、再現性が示された結果となった。しかしながら、得られたクローンが選択培地上で生育する速度は、バクテリアTwo-Hybridシステムにおいて添付されているポジティブコントロール遺伝子配列(酵母のGalタンパク質系を大腸菌用に適合化させたもの)と比較して非常に遅いものであった。このことは、選抜されてきたタンパク質がMPG1に対して結合力が弱いことを示唆するものであった。現在は、より強い結合力を持っ遺伝子配列を得るために、選抜されてきた遺伝子配列をもとにしてError-prone PCRを行い新たな選抜を試みている。

In the past year, the plant resistance gene Pib has been released and the repeated units of the robot are being utilized to achieve the quality improvement of the robot. Repeat the process of single-position overlapping, and a few times, the overlapping process, including the prevention of single-position overlapping, the method of single-position overlapping, the concentration of single-position overlapping, etc. The results were 1kb on average, and about 10 times the number of units overlapped. In this paper, we discuss the selection of gene pairs in the interaction between gene fragments of two kinds of gene fragments in subsection 8, which are related to the pathogenicity of the pathogen MPG1 and the pathogenicity of the disease. As a result, MPG1 and MPG1 interactions are observed. The basic arrangement of the two groups is clear, and the results are reproducible. The speed of reproduction in the field of selection and cultivation is different from that in the field of selection and cultivation. The binding force of MPG1 is weak. Now, the strong binding force of the gene can be detected by PCR.

项目成果

Nakamura H, Ikeda K: "Screening for hypovirulence factor in violet and white root rot fungi."Plant Protection. 58. 50-53 (2004)

Nakamura H，Ikeda K：“筛选紫罗兰和白根腐真菌中的低毒力因子。”植物保护。