メダカを用いた生体脳情報処理プロセス研究のための実験解析手法確立に関する基礎研究

建立利用青鳉鱼研究活体大脑信息处理过程的实验分析方法的基础研究

• 批准号: 13750739
• 负责人: 滝口 昇
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13750739/
• 关键词: Olyzias latipes; 嗅覚・味覚情報処理; 走化性応答; in situハイブリダイゼーション; 光学的計測; Oryzias latipes; 三次元モデル

メダカ(Olyzias latipes)が誘引、あるいは忌避応答を示す物質を調べるため走化性検定を行った。アンモニウム塩、糖、アミノ酸、アルコール、重金属塩など18種類の物質を用いたところ、硝酸アルミニウム、塩化アンモニウム、キニーネに関しては忌避応答を、シクロヘキシミド、人工飼料に関しては誘引応答が見られることが示唆された。また、感知応答に影響する他の要因を調べるために、アルミニウムを検定物質として調べたところ、飢餓状態において忌避応答が顕著になること、また、性差がありオスの方が強い忌避応答を示すことが示唆された。これらの物質を主に感知している部位を調べるため、体の様々な部位に内径1mmのチューブで直接アルミニウムを暴露したところ、口腔付近で一番強い応答を示した。また、Gタンパク質共役受容体遺伝子の発現部位を調べるためRNAプローブを用いたin situハイブリダイゼーションを試みた結果、メダカ頭部の切片サンプルでは口腔部内の表皮において強いシグナルが検出された。匂い刺激に対する脳の応答を時空間的にとらえるために、膜電位感受性色素を用いた光学的な測定を行い、メダカの脳表面における膜電位の同時計測を行った。メダカの頭部を解剖し脳を露出させた後、膜電位感受性色素(RH414)で染色、大脳の下部に位置する嗅球における膜電位の光学計測を行った。脳が酸欠状態に陥るのを防ぐため、解剖中および光学測定中は酸素を通気した人工脳脊椎液(ACSF)を還流し続けた。脳を完全に摘出した状態で、嗅神経より電気刺激(10mA,1ms)を与えたところ、刺激が嗅球全体に伝播する様子が確認でき、この条件で測定が可能であることが示された。次に、メダカの鼻の部分を残したままで嗅球部分を露出し、匂い刺激を与えたときの嗅球での応答を光学計測した。その結果、嗅球で局所的に伝播する応答が確認できた。

Olyzias latipes are attractive, evasive, and reactive substances. 18 kinds of substances are used in the production of sugar, citric acid, arsenic, heavy metals, nitric acid, nitric acid, phosphorus, artificial feed, etc. For example, if you are hungry, you will not be able to feel the effects of other factors. The main body part of the body has an inner diameter of 1mm and is directly exposed to light. The mouth part is close to the light. The results of the experiment showed that the epidermis in the oral cavity was strongly affected by the presence of RNA in the tissue. In addition, the membrane potential sensitive pigment can be measured by optical method. After the head of the mouse was dissected and exposed, the membrane potential sensitive pigment (RH414) was stained, and the membrane potential was measured optically in the lower part of the mouse. In addition, in the case of acid deficiency, in the case of anatomy and optical measurement, in the case of acid deficiency, in the case of artificial spinal fluid (ACSF), in the case of acid deficiency, in the case of spinal fluid, in the In the state of complete extraction, olfactory stimulation (10mA,1ms) is associated with confirmation of the condition under which the olfactory bulb may be measured. The olfactory bulb was exposed, and the olfactory bulb response was measured optically. The results of the olfactory bulb are confirmed.