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放線菌の生理活性物質生合成における置換型シグマ因子の関与についての研究

替代σ因子参与放线菌生理活性物质生物合成的研究

基本信息

批准号：
13760230
负责人：
安齊洋次郎
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

Mycinamicin生産菌Micromonospora griseorubida A11725およびerythromycin生産菌Saccharopolyspora erythraea JCM 4748の置換型シグマ因子遺伝子破壊株取得を試みた。各菌株からPCRで増幅した約500bpの置換型シグマ因子遺伝子の部分的DNA断片にapramycin耐性遺伝子を挿入したDNA断片を接合用プラスミドpDN19に入れたpDN11725およびpDN4748を構築した。pDN19は放線菌のoriを持たないため、効率的に組換え株を取得できる。E.coli S17-1を供与菌とした接合にて、それぞれのプラスミドを導入したところM.griseorubida A11725では3株、S.erythraea JCM 4748では2株のapramycin耐性株が出現した。M.griseorubida A11725の耐性株のうち1株でmycinamicin IIの生産の減少が確認された。また、S.erythraea JCM 4748の耐性株2株にはerythromycin生産の変化は認められなかったが、うち1株にYM寒天培地およびTS寒天培地上での生育障害が認められた。S.erythraea JCM 4748から相補遺伝子の取得を行った。上記の部分的シグマ因子遺伝子断片をもとに、シグマ因子遺伝子を含む2.8kb PstI-SphI断片をクローニングした。このシグマ因子遺伝子の上流にはanti-sigma factorをコードするORFも存在した。今後、2.8kb PstI-SphI断片を用いた相補実験やanti-sigma factor遺伝子の機能解析等を進める予定である。

Mycinamicin producer Micromonospora griseorubida A11725 and erythromycin producer Saccharomyces erythroea JCM 4748 were tested for their substitution factors. PCR amplification of each strain increased to about 500bp and the DNA fragments of the substitution-type gene fragments, apramycin resistant gene fragments, and DNA fragments for conjugation were constructed from pDN19 to pDN4748. pDN19 will be able to hold the ori of Streptomyces and obtain efficient replacement plants. E.coli S17-1 and S. erythra JCM 4748 were introduced into E. coli S17 - 1 and E. coli S17 - 1 respectively. A decrease in production of mycinamin II was confirmed in resistant strains of M.griseorubida A11725. 2 resistant strains of S. erythra JCM 4748 were identified for erythromycin production and 1 resistant strain was identified for YM cold cultivation and TS cold cultivation. S.erythraea JCM 4748 Part of the gene fragments listed above contain a 2.8 kb PstI-SphI fragment. The up-stream of the anti-sigma factor exists. In the future, the function analysis of 2.8kb PstI-SphI fragment and anti-sigma factor gene will be further determined.