全胚培養系および無血清細胞培養係を使ったマウス心内膜床の発生に関する研究

全胚胎培养系统和无血清细胞培养系统研究小鼠心内膜床发育

• 批准号: 13770009
• 负责人: 森本 武志
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770009/
• 关键词: 心臓発生; 心内膜床; 初期胚; 培養; マウス

1)マウス初期胚の無血清培養系の確立:原始線条期胚をin vitroで培養し胚の各領域の運命を解析できる系を確立するため、受精後6.0〜6.5日(膣栓日=0日)のマウス胚を培養し分化を誘導し得る新たな培養系を樹立した。この系で外胚板、中胚葉細胞、原始線条等をそれぞれ単独で培養できる培養条件を確立すると共に、中胚葉細胞から心筋細胞・横紋筋細胞を、外胚葉細胞から神経細胞を分化誘導することに成功した。2)マウス初期胚のfate mapの作成:上記の培養系を用い、初期円筒期胚を10〜15の領域に細分化して個別に培養し、その分化運命を調べた。その結果により、初期胚の各領域の分化に関するfate mapを作成し、それぞれの分化決定(commitment)の時期を推定した。これは、今後本研究プロジェクトを進めるための基礎データとなるものである。3)マウス心内膜床原基の培養法の開発:胎齢9〜9.5日胚の心臓原基ならびに10〜10.5日胚の心内膜床原基を分離して無血清培地で培養し、その分化を追跡するためのマーカー蛋白を探索した。現在、この系を用いて、心内膜床の分化に及ぼすTGF-β1,2,3の影響を調べる実験を行い、データを集積中である。なお、TGF-β2,3の遺伝子ノックアウトマウスを入手し、in vivoにおける心臓の発生を野生型マウス胚と比較すると共に、ノックアウト胚の心臓原基についてもin vitroで分化を観察できることを確認した。

1) The establishment of a serum-free culture system for early embryonic embryos: primitive line stage embryos Destiny analysis in various fields of embryo culture in vitro and establishment of the system, 6.0~6 after fertilization .On the 5th day (the day of the plug = 0th day), the embryo culture and differentiation are induced and the new culture system is established. The ectodermal plate, mesodermal cells, primitive lines, etc. of the この line are cultivated independently and the culture conditions are established and the common に, The differentiation of mesodermal cells (cardiac cells and striated muscle cells) and ectodermal cells (shin cells) was successfully induced. 2) Preparation of the fate map of early stage embryos: the culture system mentioned above, the early stage embryos of 10 to 15 years, the field of subdivision and individual cultivation, and the differentiation and fate of embryos.そのRESULTS により, Initial embryos のdifferentiation in each field に关するFate map をCREATION, それぞれのdifferentiation decision (commitment) の Period をESTIMATION.これは、From now on, this research will be carried out based on the basics of this research. 3) The method of culturing the primordium of the endocardial bed and the method of culture: embryonic day 9 to 9.5 and embryonic day 10 to 10.5 The endocardial bed primordium is isolated and cultured in serum-free culture, and the differentiation and tracing of the endocardial bed are performed and the protein is explored. Nowadays, the influence of TGF-β1,2,3 on endocardial bed differentiation and endocardial bed differentiation is adjusted and the concentration of TGF-β1,2,3 is concentrated.なお、TGF-β2,3の伝子ノックアウトマウスを开户し、in Vivo における心臓の発生をWild-type マウスEmbryo とComparison するとKOに、ノックアウトEmbryo primordium primordial についてもin In vitro differentiation and detection are confirmed.