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完全長cDNAライブラリを用いた新規マラリアDNAワクチンの探索

使用全长 cDNA 文库寻找新型疟疾 DNA 疫苗

基本信息

批准号：
13770124
负责人：
二瓶秋子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ネズミマラリア原虫Plasmpodium berghei ANKA株より作製した完全長cDNAライブラリを用いて、DNAワクチン候補遺伝子のスクリーニングをおこなった。免疫に使用するcDNAクローンは、あらかじめ5'端の塩基配列を決定し、免疫候補から空ベクターやマウスのcDNAを除外した。さらに、公開されているマラリア遺伝子のデータベースを利用して、cDNA同士の相同性を検討し、免疫に使用するクローンの重複を避けた。こうして得られた25クローンずつのサブセット8組を、Gene Gunを用いてBALB/cマウスの皮下に1週間毎に3回免疫し、最終免疫の1週間後にP.bergheiを腹腔内注射で感染させ、その生存を空ベクター(pCE-FL2)を免疫した対照群と比較検討した。その結果、この6組の中に有意な結果の得られるものはなかった(第24回日本分子生物学会にて発表)。一方、遺伝子の重複や空ベクターを除いていない約2000クローンのサブセットをGene Gunで皮下に免疫したところ、原虫感染に対し、有意に生存期間の延長が認められた(n=8,p=0.012)。以前、同サブセットを筋肉内に直接注射して同様のスクリーニング実験をおこなったところ、直接注射の場合には有意に生存の短縮がみられた。今回同サブセットがワクチンとして効果的であった原因の一つは、Gene Gunは直接注射に比べてCTLをより強く誘導するため、原虫感染に対するマウス体内の防御免疫が効率的に働いたためであると考えられる。また、マラリアワクチンには単独(あるいは少数)遺伝子よりも複数の組み合わせが効果的であるという報告もあり、その効果であるとも考えられた(現在投稿準備中)。

Plasmodium berghei ANKA strain is produced by complete long cDNA sequencing and DNA sequencing. Immunization uses cDNA to determine the nucleotide sequence at the 5'end, except for cDNA to be used as a candidate for immunization. In addition, the use of cDNA sequences in public, identification of cDNA sequences, and avoidance of duplication in immune systems 8 groups of BALB/c mice were immunized subcutaneously with pCE-FL2 for 3 times every week, and one week after the final immunization, P. berghei was injected intraperitoneally with pCE-FL2. The results of these six groups were intentionally obtained (24th Japanese Molecular Biology Society Report). The Gene Gun was found to be hypodermic immune, protozoal infection, and intentional prolongation of survival (n=8,p=0.012). In the past, direct injection into the muscle, direct injection into the muscle. In this paper, we discuss the reasons for the effect of Gene Gun injection on CTL induction, protozoan infection and immune response in vivo. The author of this article is interested in the following: (1) The author of this article is interested in the author of this article.