膵再生誘導による新しい慢性膵炎治療法の開発(骨髄間質細胞から分化誘導した膵外内分泌細胞移植による検討)

通过诱导胰腺再生开发慢性胰腺炎的新治疗方法（通过骨髓基质细胞分化的外分泌胰腺内分泌细胞移植进行检查）

• 批准号: 13770291
• 负责人: 木原 康之
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770291/
• 关键词: 骨髄間質細胞; 膵再生誘導; 膵外内分泌細胞移植

雌性C3H/Heマウスの大腿骨から骨髄細胞を採取した。Dexterの方法に準じてpenicilline, stereptomycin, amphotericin Bを添加した20%FBSを含むIscove's modified Dulbecco's mediumを用いて骨髄細胞の初代培養を行った。14週間後、壁付着細胞をTrypsin/EDTAで分離し、6週間培養し、骨髄間質細胞を得た。その後4ヶ月間継代培養し、不活化した培養株を作製した。不活化した培養株に1,10,50,100μMの5-アザシチジン(分化誘導剤)を添加し、48時間培養し、線維芽様細胞が得られた。引き続き同濃度の5-アザシチジン添加下に28日間あるいは56日間継代培養した後、培養細胞からRNAおよびを蛋白を抽出し、mRNAの発現をノザーンブロット法を用いて蛋白の発現をウエスタンブロット法を用いて検討したが、28日間継代培養群および56日間継代培養群ともに炭酸脱水素酵素mRNAおよび蛋白の発現は認められなかった。不活化した培養株に5-アザシチジンに加え、種々の濃度のTGF-β1あるいはHGFを同時に添加し、上述の方法と同様に培養し検討したが、TGF-β1添加群およびHGF1添加群のいずれにおいても炭酸脱水素酵素mRNAおよび蛋白の発現は認められなかった。さらに、不活化培養株に5-アザシチジン(1,10,50,100μM)およびアクチビンA10,50,100,200ng/mlを同時に添加した群、5-アザシチジンおよびフオリスタチン1,10,50,100,200μMを添加した群、5-アザシチジン、アクチビンAおよびフオリスタチンを添加した群のいずれにおいても炭酸脱水素酵素mRNAおよび蛋白の発現は認められなかった。

Female C3H/He femur, thigh bone, femur, bone, thigh bone and thigh bone. Dexter method: standard penicilline, stereptomycin, amphotericin B, adding "20%FBS", including "Iscove's modified Dulbecco's medium", using "bone" cell "primary culture", "line". After 14 years of age, the wall was treated with cell Trypsin/EDTA separation, 6-year-old culture, bone marrow cell culture. After 4 months of incubation, the culture plants were cultured and unactivated. The non-activating culture strain was 1050100 μ M ~ (5) μ M ~ (- 1) μ M ~ (5) μ M ~ (- 1). The culture time was 48 hours, and the culture time was 48 hours. After adding the same temperature in 28 days and 56 days in the next two days, the cell culture was used to determine the concentration of RNA protein, and the mRNA was used to detect the temperature difference between the two methods. On the 28th, Daipei group, 56 days, Daipei group, carbonic acid dehydrase mRNA, protein, protein. In the same time, TGF- β 1 was added at the same time, TGF- β 1 was added in the same way, TGF- β 1 was added in the same group, and TGF- β 1 was added in the same group. the results showed that the carbon acid dehydrase mRNAs and proteins were detected. Inactivated culture plant (1p10, 50100 μ M), strain A10, 50100, 200ng, ml, ml. Please add a group of carbonic acid dehydrase mRNA, carboxylic acid dehydrase mRNA, carboxylic acid dehydrase protein.