サイトカインによる心筋特異的電位依存性L型カルシウムチャネルの機能調節機序

细胞因子对心肌特异性电压门控 L 型钙通道的功能调节

• 批准号: 13770365
• 负责人: 高月 誠司
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770365/
• 关键词: L型カルシウムチャネル; サイトカイン; 培養心筋細胞; リン酸化; ペプチドマッピング; キナーゼ

心筋特異的電位依存性L型カルシウムチャネルは心筋細胞の興奮性、興奮収縮連関を規定する重要なチャネルである。カルシウム電流の調節は主としてα1サブユニットの細胞内ドメインのリン酸化で調節されているとされている。本研究の目的はL型カルシウムチャネルの新たな調節系を証明することである。ラット新生児培養心筋を正リン酸放射性に標識しIL-6族サイトカインであるLIFで刺激した。免疫沈降したL型カルシウムチャネルα1サブユニットはフォルスコリンによるリン酸化より強くリン酸化されていた。これらのリン酸化は必ずしもMEK1阻害薬(PD98059)では抑制できなかった。リン酸化サブユニットをペプチド片として抽出し2次元の薄層クロマトグラフィーで展開したところ、フォルスコリン、PMA、angiotensin IIによってリン酸化されたチャネルの展開パターンが異なり、それぞれ異なるリン酸化部位があることが示された。LIFによるリン酸化部位をERK1/2によるリン酸化と仮定し、そのconsensus sequenceでセリンを含む唯一の配列に対して、plasmidのS(1829)→A点変異を加えることで作成した変異体をHEK293にトランスフェクションし、パッチクランプ法を用いてチャネルの機能を確認する。この変異体ではLIFに反応するCa電流電流の増加が認められず、LIFによるリン酸化部位がS1829であり、そのリン酸化が機能調節に重要であることが示された。

The potential dependence of L-type muscle cells on cardiac muscle cells plays an important role in regulating the excitability and contraction of cardiac muscle cells. The regulation of the current in the cell is mainly due to the change of the intracellular temperature and the change of the intracellular temperature. The purpose of this study is to prove a new regulatory system for L-type tumors. IL-6 is a new type of cell culture medium. The immune system is characterized by an L-type cell cycle, an L-type cell cycle, and an L-type cell cycle. MEK1 Inhibitor (PD98059) is a new inhibitor of acid. In addition, it is necessary to prepare a two-dimensional thin layer, such as a thin film, a thin film, a LIF is the acid site ERK1/2, the acid site is stable, the consensus sequence is stable, and the acid site is unique. The plasmid S(1829) is different from the A point. The function of the acid site is confirmed by HEK293. The increase of Ca current in different kinds of LIF is important for the function adjustment of S1829 and LIF.