血小板由来成長因子(PDGF)のシグナル伝達機構及び癌化調節機構の検討

血小板源性生长因子（PDGF）信号转导机制及肿瘤调控机制研究

• 批准号: 13770436
• 负责人: 清水 顕
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: 山梨医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770436/
• 关键词: 隆起性皮膚線維肉腫; DFSP; PDGF; STI-571

ヒトDFSP由来腫瘍細胞をskin biopsy時に収集し、in vitro培養系にて継代培養した後、6つのprimary cultureを樹立した。これら腫瘍細胞におけるCOL1A1/PDGFB fusion遺伝子の発現を特異的なprobeを作製し、RT-PCR法及びノーザンブロット法にて確認した。腫瘍細胞におけるPDGF β型受容体の発現及びそのリン酸化の程度を検討するため、抗PDGF β型受容体血清にて免疫沈降した後抗tyrosine抗体を用いてウエスタンブロット法を行ったところ、全例でPDGF β型受容体の発現及び活性化を認めた。次にPDGF β型受容体の特異的阻害剤(STI-571)によるin vitroでの増殖能に関する影響を検討したところ、60-75%の増殖抑制が認められた。in vitroにおいてCOL1A1/PDGFB fusion遺伝子を発現しているDFSP腫瘍細胞をnude miceの皮下に移植し、in vivoでの腫瘍形成能を検討したところ、6例中1例の腫瘍細胞が皮下に腫瘍を形成した。PDGF β型受容体阻害剤を投与し、腫瘍の増殖能に及ぼす影響を検討したところ、腫瘍の増殖が阻害され、TUNEL法によりアポトーシスが誘導されていることが確認された。ヒトDFSP腫瘍の発生、増殖においてPDGFBによるautocrine PDGF β型受容体の活性化が関与している可能性が示唆された。PDGF β型受容体の特異的阻害剤であるSTI-571は、生物毒性なども少なく、現在CMLなどの白血病治療薬となっており、今後ヒトDFSP腫瘍の薬物的治療として有用である可能性が示唆される。

DFSP was collected from tumor cells during skin biopsy, cultured in vitro, and established in primary culture. The expression of COL-1A-1/PDGFB fusion protein was confirmed by specific probe, RT-PCR and PCR. The occurrence and degree of acidification of PDGF β-type receptors in tumor cells were investigated. After immune sedimentation in anti-PDGF β-type receptor serum, anti-tyrosine antibodies were used to perform the Estatt assay. In all cases, the occurrence and activation of PDGF β-type receptors were recognized. The second is PDGF beta receptor specific inhibitor (STI-571), which is believed to inhibit proliferation by 60-75%. In vitro, COL1A1/PDGFB fusion gene was found in DFSP tumor cells transplanted subcutaneously in nude mice, and tumor formation in vivo was investigated in 1 of 6 cases. PDGF beta receptor inhibition and tumor growth inhibition were investigated by TUNEL assay. The possibility of activation of autocrine PDGF β-type receptors in the development and proliferation of DFSP tumors was demonstrated. PDGF β receptor specific inhibitor STI-571, biotoxicity, leukemia treatment for CML now, and the possibility of useful DFSP tumor treatment in the future.