特異的NF-KB抑制法に基づく慢性進行性腎炎の進展機序の解明および治療法の検討

基于特异性NF-KB抑制方法阐明慢性进行性肾炎的进展机制并研究治疗方法

• 批准号: 13770606
• 负责人: 力石 昭宏
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770606/
• 关键词: NF-KB; 安定型IKBα; アデノウィルスベクター; 尿細管間質障害

Wistarラットに片側腎臓摘出を行った後、アルブミン大量負荷(Bovine Serum Albumin(BSA)を2g/日ずつ腹腔内投与連日を3週間)を行い、持続的大量蛋白尿による尿細管間質障害モデルラットを作成した。当モデルに対してアデノウィルスベクターを腎動脈より注入することにより尿細管上皮細胞特異的に安定型IκBαを発現させ、腎間質障害における尿細管上皮細胞の核転写因子NF-κBの果たす役割について検討した。安定型IκBα導入群ではLacZ遺伝子導入群に比較して、Electromobility Shift Assayによる腎皮質のNF-κB発現量増加の著明な抑制効果を認め、これは病理組織学的解析(PAS染色、Masson-Trichrom染色)における尿細管間質障害スコアの有意な改善を伴っていた。さらに免疫組織染色による解析では浸潤マクロファージ(ED-1)数、TGF-β・Fibronectinの発現量が安定型IκBα導入群では有意に抑制されていた。さらに現在、DNAマイクロアレイ法を用いた両群の遺伝子発現プロファイルの変化の比較検討を行っており、尿細管上皮細胞におけるNF-κB下流遺伝子群のうち尿細管間質障害の進展に重要な役割を果たす因子の解析を進めている。さらに片側腎臓摘出を行ったWistarラットにThy-1抗体を静脈内投与することによって慢性進行性糸球体腎炎を惹起し、腎炎4週間後より前述の方法で尿細管上皮細胞特異的に安定型IκBαを発現させ、腎炎8週間後においてその治療効果を検討した。現時点の病理組織学的解析では安定型IκBα導入群のLacZ遺伝子導入群に対する尿細管間質障害の改善効果は有意なものではなかった。今後検討すべき課題として、遺伝子治療の開始時期の変更や、CTLA4-Ig発現アデノウィルスベクターの同時導入による安定型IκBα発現期間の延長を図ること、なとが挙げられる。

After the Wistar kidney is extracted, the large amount of protein (Bovine Serum Albumin(BSA))(2 g/day) is injected into the abdominal cavity for 3 weeks. When the renal artery is injected into the kidney, the expression of stable IκBα specific to urinary tubule epithelial cells and the effect of NF-κB on urinary tubule epithelial cells in the presence of renal interstitial damage are studied. Comparison of stable IκBα introgression group with LacZ gene introgression group, Electromobility Shift Assay, increased NF-κB production in renal cortex, identification of inhibitory effects, histopathological analysis (PAS staining, Masson-Trichrom staining), and intentional improvement of urinary tubule interstitial damage. Immunohistochemical analysis revealed that the number of invasive proteins (ED-1), the expression of TGF-β·Fibronectin, and the stable IκBα induction group were intentionally inhibited. In addition, comparative analysis of gene expression and protein transformation of NF-κB downstream gene subgroup in urine tubule epithelial cells using DNA sequencing method was carried out to analyze the important factors for the development of interstitial damage in urine tubule. The Thy-1 antibody was administered intravenously to patients with chronic progressive glomerulonephritis after 4 weeks. The results of treatment were discussed after 8 weeks of glomerulonephritis and the development of stable IκBα specific to urinary tubule epithelial cells. Pathological analysis of the present site indicates that the stable IκBα intron group and LacZ intron group are responsible for the improvement of urinary tubule interstitial damage. Future research topics include: the change of the initial period of gene therapy, the extension of the stable IκBα development period due to the simultaneous introduction of CTLA4-Ig.