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羊膜由来細胞株の神経細胞への分化誘導と神経細胞移植への応用

羊膜来源细胞系向神经细胞的诱导分化及其在神经细胞移植中的应用

基本信息

批准号：
13770621
负责人：
森本昌史
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト羊膜上皮細胞は胎生初期の外胚葉由来の細胞で、適切な培養下で神経系の細胞に分化することが知られている。ヒト羊膜由来細胞を神経細胞への分化を強く誘導する条件の培地で培養し、神経細胞への誘導分化を行い、成ラットの脳の線条体、脳室周囲などに移植を行った。ヒト羊膜由来細胞より調製した細胞浮遊液をコートしていない培養皿を用い、OPTI-MEM^<TM>に5%胎仔牛血清、上皮細胞成長因子(EGF)、塩基性線維芽細胞成長因子(bFGF)を添加した培地で培養を行った。培養開始2日後に、再び細胞を集め、浮遊液とし、bFGF, all-trans retinoic acid (RA)などを添加した無血清培地を用いて、更に2日間培養後、定位脳手術装置を用いて8週齢ラットの脳に移植を行った。この時、羊膜由来細胞にはGFPが発現されるプラスミドを組み込んだ。移植後、1週、4週にラットを還流固定し、移植された細胞の動態を調べた。4週目に至っても、生着した移植細胞はみられた。蛍光抗体法でGFAPの発現やMAP-2の発現がみられ、ダリア細胞や神経細胞に分化している細胞もみられたが、その割合は低かった。また、1週目と4週目に分化した細胞の割合や数に有意な差はみられなかったが、4週目は1週目に比べて移植された細胞が分散している傾向があった。更に、BrdUの取り込みから移植細胞の増殖能はほとんどみられなかった。今後、生着細胞の割合を増やし、高率に神経細胞に分化させる条件の検討を要すると考えられた。

Amniotic epithelial cells are derived from epiblast cells at the early stage of embryogenesis, and are known to differentiate into neuroblast cells under appropriate culture conditions. Under the conditions of culture, induction and differentiation of amniotic cells-derived neurons, induction and differentiation of neuronal cells-derived neurons, formation of line-derived neurons, and transplantation of amniotic cells-derived neurons. The <TM>culture medium of amniotic cell-derived culture medium was prepared by adding 5% fetal bovine serum, epidermal growth factor (EGF) and basic fibroblast growth factor (bFGF) to the culture medium. 2 days after culture start, re-culture of cells, suspension, bFGF, all-trans retinoic acid (RA), addition of serum-free culture medium, 2 days after culture, positioning of surgical device, 8 weeks after transplantation. In this case, GFP was found in amniotic derived cells. After transplantation, 1 week and 4 weeks, the flow rate of cells was fixed and the dynamics of cells were adjusted. 4 weeks after transplantation The expression of GFAP and MAP-2 by light antibody method was studied. The number of cells that differentiate between 1 week and 4 weeks is intentionally different from that of 1 week. In addition, BrdU can be used to transplant cells and proliferate them. In the future, the growth of cells and the high rate of cell differentiation will be discussed.