新生児慢性肺疾患の病態におけるクララ細胞分泌蛋白の役割に関する検討

Clara细胞分泌蛋白在新生儿慢性肺病病理中的作用研究

• 批准号: 13770626
• 负责人: 林田 慎哉
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770626/
• 关键词: CCSP; 慢性肺疾患; ELISA; クララ細胞分泌蛋白; 新生児慢性肺疾患

Clara cell secretory protein(CCSP)は、気道の非繊毛上皮細胞から豊富に発現される蛋白で、その機能と動態は、完全には解明されていない。現在までの研究から、機能に関しては気道での抗炎症作用を持つことが示唆され、動態に関しては気道での炎症時に気道から血液中への漏出が増加するとともに発現量が抑制されることが示唆されている。極低出生体重児の慢性肺疾患は気道での慢性炎症を病態の中心とする。この疾患におけるCCSPの動態を解明し、抗炎症作用を持つとされるCCSPの補充療法の可能性を探るのが本研究の最終的な目的である。精製したrrCCSPの生化学的な性質がnative CCSPに近いものである事を確認するために、カルシウムイオン(以下Ca^<2+>)結合能を測定した。Ruthenium RedはCa^<2+>と結合する蛋白に結合し、多量のCa^<2+>により結合した蛋白から解離する。RrCCSPは、Ruthenium Redとの結合能、Ca^<2+>を加えたときのRuthenium Redの解離曲線、ともに以前にマウスのnative CCSPで報告されている値に近似した値が得られた。精製したrrCCSPを、ウサギとギニアピッグに繰返し注射する事で、二種類の抗CCSP抗体を得た。これらの抗体を用いて、マウスの肺ホモジェネートと気管支肺胞洗浄液を用いたWestern blot analysis、マウスの肺組織を用いた免疫組織染色を行った。どちらの抗体も、Western blot analysis・免疫組織染色ともにnative CCSPに対し、良好な感度・特異性を示した。二種類の抗CCSP抗体を用いて、ELISAシステムを確立し、マウスの気管支肺胞洗浄液中のCCSP濃度の測定を試みた。サンドイッチELISA法、間接ELISA法の二種類を試み、ウサギ抗rrCCSP抗体を用いた間接ELISA法による測定が、最も適していると判明した。

The cells of Clara cell secretory protein (CCSP) and non-hair epithelium are rich in protein, dynamic and complete understanding of protein and protein. At present, in the field of research and research, the anti-inflammatory effects of anti-inflammatory drugs, the signs of anti-inflammation, and the signs of inflammation, the leakage of drugs from the blood during the period of inflammation and the inhibition of anti-inflammatory effects. Very low birth weight, chronic lung disease, chronic inflammation, central disease. To explore the possibility of disease, CCSP, dynamic explanation and anti-inflammatory effect, the most important purpose of this study is to explore the possibility of anti-inflammatory effect. The chemical properties of rrCCSP biochemistry can be determined by the combination of confirmation of biochemical properties (Ca ^ & lt;2+>). Ruthenium Red Ca ^ & lt;2+> combined with protein binding, and a large amount of Ca ^ & lt;2+> with protein binding. The combination of RrCCSP and Ruthenium Red data, CAC ^ & lt;2+> can help you to solve the Ruthenium Red separation curve, and you can use your previous native CCSP reports to improve your performance. The rrCCSP and anti-CCSP antibodies were obtained after the injection of two kinds of anti-DNA antibodies. The lung tissue was stained with immune tissue staining, and the lung tissue was stained with immune tissue staining. The antibody and Western blot analysis immuno-tissue staining were used to detect native CCSP antibody and good sensitivity. The two kinds of anti-CCSP antibodies were determined by Elisa, Elisa assay and CCSP assay in bronchoalveolar lavage fluid. The ELISA method, the ELISA method and the ELISA method were used to determine the anti-rrCCSP antibody.

项目成果

Mori K, Kurihara N, Obi S, Hayashida S, Tokieda K, Ikeda K: "Intratracheal instillation of perfluorocarbon rescued mice with primary pulmonary hypoplasia"Exp Lung Res. 28・6. 523-533 (2002)

Mori K、Kurihara N、Obi S、Hayashida S、Tokieda K、Ikeda K：“原发性肺发育不全小鼠的气管内滴注”Exp Lung Res 28・6（2002）。