低温誘導性蛋白RBM3の精子形成における働きに関する研究

冷诱导蛋白RBM3在精子发生中的作用研究

• 批准号: 13770897
• 负责人: 檀野 祥三
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770897/
• 关键词: 低温誘導性蛋白; RBM3; セルトリ細胞; アンチセンスオリゴ; DNAチップ

昨年度、作成したRBM3に対するアンチセンスオリゴ、およびセンスオリゴのTAMA26(マウスセルトリ細胞株)におけるRBM3蛋白の抑制効果をポリクローナル抗体を用いて確認を行なったが、不完全であったため新たにアンチセンスオリゴの作成を行なった。今回はGENE TOOLS社のSpecial Delivery Morpholino oligoにて作成を行なった。この方法ではspecial delivery systemにより飛躍的に細胞内へのオリゴヌクレオチドの取り込みが改善することが期待された。まずTAMA26に対して低温ショック(37℃で細胞の継代を続けた後、これらセンスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入、約3時間インキュベートの後、32℃に移した)を与え、RBM3の発現の差を確認した。確認の方法としてはこれら細胞株から蛋白を抽出後、RBM3に対するポリクローナル抗体を用いたウエスタンブロッティング法を用いた。その結果、アンチセンスオリゴヌクレオチドを加えたTAMA26においてセンスオリゴヌクレオチドをクワイ得たものに比較しRBM3の発現の抑制効果が確認できた。さらにAmbion社のRNAqueous(total RNA isolation kit)をもちいて残りの細胞からtotalRNAを抽出。これから作成したcDNAをもとにDNAチップをもちいてマウスでの既知遺伝子の発現への影響が検討可能となる。今回、われわれはアンチセンスオリゴの改変により低温ショック蛋白RBM3が、マウスセルトリ細胞株において抑制可能であることを証明した。今後この方法は、RBM3が細胞内でいかなる機能を持っているかを解析する上で有効な手段となり得ると考えられた。

Last year, the RBM3 protein was used to inhibit the growth of the cell line (TAMA26). Last year, the RBM3 protein was used to inhibit the growth of the cell line (cell line). Last year, the results showed that the RBM3 protein suppressed the cell line. This time, the GENE TOOLS community has made a series of Special Delivery Morpholino oligo calls. In the method of special delivery system, we need to know how to improve the quality of the cells. The temperature difference between TAMA26 and RBM3 was confirmed after the temperature of 37 ℃, the temperature of 37 ℃ and the temperature of 32 ℃. Make sure that after the protein of the cell line is extracted, the RBM3 protein is extracted and the antibody is used. The results were compared with the results of the RBM3 test. The results show that the suppression effect is not correct. The results show that the TAMA26 is not valid. The Ambion community RNAqueous (totalRNA isolation kit), the disabled, the cell, the totalRNA, the extraction. You know, you know, you may have a problem. This time, the temperature was low, the protein RBM3 was low, the cell line was inhibited, and the inhibition was possible. In the future, we will be able to use the method and RBM3 to analyze the results of the analysis of the method and the intracellular DNA of the cell.