チロシンキナーゼ阻害抗腫瘍剤STI571に対する新しい耐性機序の解析

酪氨酸激酶抑制剂抗肿瘤药物STI571的新耐药机制分析

• 批准号: 14770534
• 负责人: 樽本 高壽
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770534/
• 关键词: 慢性骨髄性白血病; 薬剤耐性; Nrf2; γ-GcS; Ascorbic acid; KCL22; SR

ヒト慢性骨髄性白血病(CML)由来細胞株KCL22から樹立されたSTI571耐性亜株KCL22/SRを実験に用いて以下のことを明らかにした。1.KCL22/SRとKCL22におけるP糖蛋白とBCR/ABL蛋白発現に有意差は認めなかった。2.KCL22/SRではKCL22と比較して細胞内GSH濃度が約2倍に上昇していた。3.KCL22/SRではKCL22と比較してγ-GCSl mRNAの発現が亢進していたが、Ascorbic acid(AsA)によって抑制された。4.ゲルシフト法にてKCL22/SRではKCL22と比較してNrf2転写因子のDNA結合活性の増加が認められたがAsAによって抑制された。5.0.125mM AsAによってKCL22/SRにおけるSTI571に対する感受性が回復した。これまでにおける以上の成果を踏まえて、その詳細なメカニズムについてNrf2転写因子活性の側面から更なる解析を行い次のような新しい知見を得た。1.細胞質内と核内におけるNrf2蛋白量をウエスタンブロット法にて測定した結果、KCL22/SRではKCL22に比べて、Nrf2転写因子が核内に多く遍在することが判明した。2.KCL22/SRの核内におけるNrf2転写因子量は0.125mM AsAによって低下することが明らかとなった。3.KCL22/SRにγ-GCSl gene promoterとルシフェラーゼ遺伝子との融合コンストラクトを導入した。さらにNrf2全長および転写活性ドメインを欠落させたDominant negative formを共発現させた。レポーターアッセイにより、Nrf2がantioxidant response element (ARE)を介して遺伝子発現に重要な役割を果たしていることが明らかとなった。

Chronic Osteopathic Leukemia (CML) is derived from a cell line KCL22, which is resistant to STI571. 1. KCL22/SR and KCL22 protein expression is intentionally different from BCR/ABL protein expression. 2. KCL22/SR increased about 2-fold compared with KCL22. 3. KCL22/SR is the opposite of KCL22 and γ-GCSl mRNA expression is increased and inhibited by Ascorbic acid(AsA). 4. The DNA binding activity of KCL22/SR was inhibited by AsA. 5.0.125 mM AsA was used to detect KCL22/SR and STI571. The above results were obtained by detailed analysis of Nrf2 gene activity and analysis of Nrf2 gene activity. 1. Nrf2 protein content in cytoplasm and nucleus was determined by the method of KCL22/SR and KCL22 protein content was determined by the method of Nrf2 protein content in nucleus. 2. KCL22/SR has a nuclear factor of 0.125 mM AsA. 3. KCL22/SR γ-GCSl gene promoter and fusion gene promoter are introduced. Today, the Dominant negative form of Nrf2's full-length and write-active interface has been jointly announced. Nrf2 and antioxidant response element (ARE) are important for the development of the virus.