下垂体分化誘導遺伝子に対するアルコール作用点の決定

酒精对垂体分化诱导基因作用点的测定

• 批准号: 14770572
• 负责人: 松本 由樹
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kagawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770572/
• 关键词: アルコール作用; 視床下部; 下垂体; 体成長; 生殖機能; 遺伝子発現; 定量解析

研究実績の概要本研究の目的は、アルコール曝露による視床下部-下垂体系の正常確立が逸脱する遺伝子発現パターンを同定し下垂体分化誘導遺伝子に対するアルコール作用点を示すものである。平成15年度はラットを用いたモデル実験動物を作成し、視床下部の神経ペプチドである成長ホルモン放出刺激ホルモン:GHRH、ソマトスタチン:SRIH及び脳由来神経成長因子:BDNFに着眼し遺伝子発現の定量解析及び免疫組織化学法を用いて評価した。Wistar系雄ラットの新生仔を10日齢から15日齢まで6日間連続して、1日あたり3時間アルコール蒸気に曝露(血中アルコール濃度;約430mg/dL)し実験動物モデルとした。曝露終了後から出生16、20、30、60日目に当たる日を材料採取日と定め、同条件における対照ラットとして母性剥離ラットおよび同週例の対照ラットの解析を同時に行った。材料採取は、組織内のRNAを効率的に回収するためにRNase非存在下で視床下部領域を採取し、total RNAの評価には吸光度比が260/280において1.6〜1.8であることを確認し、すべてのmRNA濃度を統一してからcDNA合成を行った。日本ロシュ社のRealtime PCRをもちいて視床下部領域で転写されるmRNA量を28S ribosomal RNA配列を内部標準として定量解析を行った。本研究および予備実験の結果として、アルコール曝露終了後出生16日齢対照ラット群の値を100とした場合には、SRIHmRNA発現で雌雄ともに上昇、BDNFmRNA発現量では雄のみ上昇していた。しかしながら、アルコール曝露群対照ラットにあたる母性剥離ラットのSRIH,BDNFmRNA発現量は、アルコール曝露後出生20日齢において実験動物モデルラットよりも高い値を示した。対照ラットの環境要因を明確にするために母性剥離による影響を下垂体重量で検討した結果、対照ラットに比べて母性剥離ラットで出生20,30日齢で減少し,出生60日令においては増加していた。さらに、母性剥離ラットの視床下部GHRH及びSRIH受容体mRNA発現は、出生20日齢よりも60日齢で高い値を示した。以上の結果から、アルコール曝露直後のSRIH, BDNFmRNA発現は性差が生じていた。一方、曝露後20日齢では、対照としての母性剥離ラットにおける発現量の上昇により、複雑な環境要因がもたらしたと考えられる。これらの事は、母性剥離ラットの解析結果として、環境要因がもたらす重要な所見として投稿準備中であり、アルコール作用を含む出生後の胎児における環境要因の解明へと発展するものである。

研究成就的总结本研究的目的是确定由于酒精暴露而偏离下丘脑垂体系统正常建立的基因表达模式，并显示出诱导垂体分化的基因的酒精作用点。在2003年，使用大鼠制备模型实验动物，并使用对基因表达和免疫组织化学的定量分析进行了评估，重点是生长激素释放刺激激素：GHRH，生长抑素：SRIH和脑源性神经生长因子：BDNF：BDNF，BDNF，BDNF，是假霉菌的神经肽。雄性Wistar大鼠的新生儿每天暴露于酒精蒸气中3小时（血液酒精浓度：大约430 mg/dl），连续六天起，从10至15天大的年龄，并被用作实验动物模型。暴露结束后，在相同条件下，分析了16、20、30和60的出生日期为材料收集日期，同一周的母体分离大鼠和对照大鼠被分析为对照大鼠。进行材料收集以有效地在组织中收集RNA，在没有RNase的情况下收集下丘脑区域，为了评估总RNA，确认在260/280的吸光度比为1.6-1.8，并且在统一所有mRNA浓度后进行了cDNA合成。使用28S核糖体RNA序列进行定量分析，用于使用Nippon Roche的实时PCR作为内标。这项研究和初步实验的结果是，当酒精暴露后16天大的对照大鼠组的价值设置为100时，在SRIH mRNA表达中，雄性和女性都增加了，而在BDNF mRNA表达水平中，只有男性和男性增加。然而，在酒精暴露的组对照大鼠中，在饮酒后20天出生后，在酒精暴露的组对照大鼠中，在饮酒的群体对照大鼠中，SRIH和BDNF mRNA的表达水平高于实验动物模型大鼠的表达水平。为了阐明对照大鼠的环境因素，通过垂体体重检查了母体脱离的作用，结果表明，与对照大鼠相比，在出生20和30天的出生时20天和30天，孕产妇脱离的作用降低，并在出生后60天增加。此外，在母体分离的大鼠中，下丘脑GHRH和SRIH受体mRNA表达在60天龄的时候高于出生后20天。从上述结果中，酒精暴露后立即在SRIH和BDNF mRNA表达中存在性别差异。另一方面，在暴露20天的情况下，据信，作为对照的母体分离大鼠的表达水平升高导致了复杂的环境因素。目前，这些人正在准备将由于对母体脱落的大鼠的分析而导致环境因素带来的重要发现，并将发展为阐明产后胎儿的环境因素，包括酒精效应。

项目成果

Takanobu Sakurai: "Colocalization of taurine and glial fibrillary acidic protein immunoreactivity in mouse hippocampus induced by short-term ethanol exposure."Brain Res. 959. 160-164 (2003)

Takanobu Sakurai：“短期乙醇暴露诱导小鼠海马中牛磺酸和神经胶质原纤维酸性蛋白免疫反应性的共定位。”Brain Res。

Yoshiki Matsumoto: "Developmental changes in growth hormone (GH) cells in Mini rats"Dev Brain Res. (in press). (2004)

Yoshiki Matsumoto：“迷你大鼠生长激素 (GH) 细胞的发育变化”Dev Brain Res。