权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

自己ポリユビキチン化によるBARD1の安定性と細胞内局在の変化

由于自身多泛素化导致 BARD1 稳定性和亚细胞定位发生变化

基本信息

批准号：
14770630
负责人：
橋詰倫太郎
金额：
$ 2.11万
依托单位：
St. Marianna University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770630/
关键词：
BRCA1 BARD1 RINGフィンガーユビキチンリガーゼ家族性乳癌タンパク質分解

项目摘要

BRCA1-BARD1ユビキチンリガーゼはLys-6を介したユビキチン鎖を触媒する。中間報告ではDominant Negative作用を有する死活型UbcH7を用いた実験結果から、Lys-6を介したユビキチン鎖によるBRCA1の自己ユビキチン化はタンパク質分解のシグナルである可能性を報告したが、その後の研究者の所属する研究室の詳細な実験結果からLys-6を介したユビキチン鎖はタンパク質分解のシグナルではなく、プロテアソームによって脱ユビキチン化されることが判明した。BARD1の細胞内局在の解析に関してはBARD1のC末端に対する抗体を用いて内因性BARD1の局在を共焦点レーザー顕微鏡にて解析した。細胞周期においてBRCA1はS期からG2-M期にかけて出現し、この時期にBARD1と結合し、ユビキチンリガーゼ活性を獲得すると考えられるが、興味あることにS期では核内でdot形成しているBARD1がM期において発現が増強し、染色体周囲に局在することがわかった。すなわち、M期にBRCA1-BARD1は自己ユビキチン化して安定化し、さらに強い活性を獲得していることが考えられた。自己ユビキチン化がこの局在に与える影響を解析するためにLys残基をArg残基に変異させたユビキチンを共発現させてBARD1の細胞内局在の変化を観察したが、明らかな局在の変化は認められなかった。さらに、自己ユビキチン化したBARD1およびBRCA1とBRCA1-BARD1ヘテロダイマー型ユビキチンリガーゼがBRCA1の癌抑制機能上どんな役割をもつか解明するために、BRCA1(N末端)、BRAD1および変異型ユビキチンによるp21遺伝子の転写調節への影響をルシフェラーゼ・アッセイにて解析したが、転写活性には有意な影響は認められなかった。

BRCA1-BARD1 ユビキチンリガーゼはLys-6を开したユビキチン lock をcatalyst する. Intermediate reportではDominant Negative action: UbcH7 has a life-and-death type, and the result is a negative effect, and Lys-6 is introduced.キチンLOCK によるBRCA1のown ユビキチン化はタンパク Mass decomposition のシグナルである possibility を report したが、その后のResearcherのAffiliatedするLaboratoryのDetailsな実験RESULTSからLys-6を Introductionしたユビキチンlockはタのシグナルではなく、プロテアソームによって出ユビキチン化されることが见明した. The intracellular localization of BARD1 was analyzed using a confocal microscope using a C-terminal antibody of BARD1. The appearance of BRCA1 in the S phase of the cell cycle, the G2-M phase in the G2-M phase, the appearance of BARD1 in the cell cycle, and the activity of BARD1 in the cell cycle are obtained in the cell cycle.られるが、心丝あることにS phase では内でdot formation しているBARD In the 1st M stage, the appearance of the chromosomes has increased, and the chromosome circumference has increased.すなわち, M phase にBRCA1-BARD1は own ユビキチン化して stabilizationし, さらにstrongいActivityをget していることが考えられた. Oneself ユビキチンがこのbureau in に and える influence をanalysis するためにLys residue をArg residue に変different させたユビキチンを公発 appear させてBARD1's intracellular localization is in the の変化を観看したが, 明らかな bureau is in the の変化はcognition められなかった.さらに、himselfユビキチン化したBARD1およびBRCA1とBRCA1-BARD1ヘテロダイマーtype ユビキチンリガーゼがBRCA1のcancer suppressor function upper どんな佒もつか解明するために, BRCA1 (N-terminus), BRAD1 および変 heterogeneous ユビキチンによるp21缝子の転WRITING REGULATION へのInfluence をルシフェラーゼ・アッセイにてanalytic したが, 転WRITING ACTIVITY にはINTERNATIONAL ANALYSIS められなかった.