ヒト膵癌における特異抗原同定から抗体療法への展望(膵癌特異抗体の作製)

人类胰腺癌特异性抗原鉴定的抗体治疗前景（胰腺癌特异性抗体的生产）

基本信息

批准号：
14770651
负责人：
池田直也
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は膵癌の腫瘍構成成分である間質に注目し、膵癌細胞と腫瘍内間質との相互作用に着目して実験を立ち上げた。他の癌腫に比べて多くの間質を有する膵癌の特徴を考え膵癌細胞が腫瘍として悪性度を獲得するためにははじめに膵癌細胞が周囲の間質に働きかけ、次のステップとして周囲の間質よりパラクライン的に必要なgrowth factor等を得て膵癌細胞にとって都合の良い環境を築いてゆくのではないかと考えた。間質のなかでも線維芽細胞に着目し、膵癌細胞自体が分泌し、線維芽細胞に影響を与える特異的分子が存在すると考え、臨床応用を目的とした膵癌に特異的で且つ機能を有するモノクローナル抗体の作製を計画した。14年度は当科にて樹立した線維芽細胞株NAFI-1の遊走能を抑制するモノクローナル抗体をスクリーニングにより二種類得た。15年度はさらに、新たに膵癌切除標本より培養を繰り返して膵癌由来線維芽細胞株PNAFI-1を樹立した。このPNAFI-1の培養上清を加えて多数のヒト膵癌株を培養したところ、9株中7株で著明に増殖能が高まることが判明した。また、逆にPNAFI-1も単独培養よりも膵癌細胞株培養上清を添加した際に増殖能並びに遊走能が高まることが判明した。さらに興味深いことに、切除胃癌より樹立した胃癌由来線維芽細胞株の培養上清を膵癌細胞株に添加しても増殖能に変化は認めなかった。これらの実験結果より、膵癌細胞と膵線維芽細胞とは膵癌という腫瘍を形成してゆくなかで互いに相乗効果を及ぼすという結果を得ることができた。また、前回に同様のモノクローナル抗体の作製方法にて血管新生を標的としたモノクローナル抗体作製においては、ヒト線維肉腫細胞株HT1080の細胞運動を著明に阻止し、且つ、血管内皮細胞モデルHUVECの運動、並びに管腔形成を著明に抑制するMAb MH8-11が得られ、このモノクローナル抗体は遺伝子クローニングによりAminopeptidase N (APN)/CD13を認識していることをつきとめた。さらに、ヒト膵癌におけるAPN/CD13発現の意義を検討したところ、血管新生の指標とした血管密度と有意に相関し、また、APN/CD13は予後不良膵癌における重要な予後規定因子の一つであることを見いだした。以上の研究結果は、 Clin Cancer Res.2003 Apr :9(4):1503-1508、Anticancer Res.2003 Mar-Apr :23(2B):1333-1341、Anticancer Res.2003 Nov-Dec :23(6C):4721-7、Oncol Rep.2004 Feb :11(2):277-84に論文発表した。

这项研究的重点是基质，胰腺癌的肿瘤成分，并发起了一个实验，重点是胰腺癌细胞与肿瘤内基质之间的相互作用。考虑到胰腺癌的特征比其他癌具有更多的基质，我们认为，为了使胰腺癌细胞作为肿瘤获得恶性肿瘤，胰腺癌细胞首先在周围的基质上起作用，并且作为下一步，我们将获得周围型细胞所必需的生长因子，从而使环境变得帕克酸是paraptrace cancrace careatient parcreatient parcreatient parcraTient parcraTIent parcraTIent parcraTIent parcraTIent parcr的。我们认为，关注基质中的成纤维细胞，我们认为存在分泌胰腺癌细胞本身并影响成纤维细胞的特定分子，并计划产生针对胰腺癌特异性的单克隆抗体，并具有用于临床应用的功能。 2014年，筛选了两种单克隆抗体，以抑制在我们部门建立的成纤维细胞线NAFI-1的迁移能力。 2015年，我们还建立了胰腺癌衍生的成纤维细胞系PNAFI-1，该细胞系PNAFI-1是从切除的胰腺癌中反复培养的。当将这种PNAFI-1的上清液添加到培养大量人类胰腺癌菌株中时，发现九种菌株中有七个显着提高了其增殖潜力。相反，发现与单个培养物相比，当胰腺癌细胞系的上清液增加时，PNAFI-1也具有更高的增殖和迁移能力。更有趣的是，当将根据切除的胃癌建立的胃癌衍生的成纤维细胞系的培养上清液添加到胰腺癌细胞系时，没有观察到增殖能力的变化。这些实验结果表明，胰腺癌细胞和胰腺成纤维细胞在形成称为胰腺癌的肿瘤时相互互相作用。此外，在产生靶向血管生成的单克隆抗体的相同方法中，获得了MAB MH8-11，从而显着抑制了人类纤维肉瘤细胞系HT1080的运动，并显着抑制了血管内皮细胞模型的血管内皮细胞模型的运动，并形成了Monocenal andocenal and codyal andibyal andibyal andibyal andibyal insoclonal andibyal。发现该单克隆抗体通过基因克隆识别氨基肽酶N（APN）/CD13。此外，当我们检查APN/CD13在人类胰腺癌中的表达的重要性时，我们发现它与血管密度显着相关，血管密度是血管生成的指标，APN/CD13是胰腺癌的重要预后因素之一。上述研究的结果发表在Clin Cancer Res.2003 Apr：9（4）：1503-1508，Anticancer Res.2003 MAR-APR：23（2B）：1333-1341，Anticancer Res.2003 Novec：23（6C）：23（6C）：4721-7：4721-7，和Oncol Rep.2004 Feb：277-7-7-7-7-7-84：277-84：277-7-84.77-84。