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胆管細胞癌に対する新規治療戦略の開発(肝内転移およびリンパ節転移の機序解明)

胆管细胞癌治疗新策略的开发（阐明肝内转移和淋巴结转移的机制）

基本信息

批准号：
14770650
负责人：
長尾美津男
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770650/
关键词：
胆管細胞癌膵癌 HIF1α siRNA VEGF 血管新生 HIF-1α

项目摘要

1)HIF1αの発現抑制に対してsiRNA発現vectorを用いていたが、その改良を行った。以前のsiRNA発現形態はtandem型と呼ばれるものであったが、より効果を増強させるためにstem loop型と呼ばれる発現形態のものに変更した。その際に再度HIF1αに対するtarget配列の検討と効果に影響を与えるとされるloop配列についての検討も行い、以前のものより効果的な抑制効果を有するvectorを作製した。効果の確認はnorthern blotting、western blottingにて行った。2)HIF1αに対するsiRNA発現vectorの効果を膵癌細胞株M1A Paca2、PK-8、PANC-1、胆管癌細胞株TFK-1、HuCCT1、肝癌細胞株HepG2において検討した。通常状態、低酸素状態の両方でcolony formation assayを施行したが、HepG2以外の細胞株に関しては低酸素下だけでなく、通常状態でもある程度の増殖抑制効果が認められた。3)HIF1αの抑制による増殖抑制効果を検討するため、HIF1αにより転写の制御を受けているVEGF、Glut1、Aldorase Aの詳細な検討と、flow cytometry、Hoechst染色による細胞周期、アポトーシスの検討を行った。結果、糖代謝に関与するGlut1、Aldorase Aが、特に低酸素下でHIF1αを抑制することにより著明に抑制されていることが確認できた。また増殖抑制には細胞周期はあまり関与しておらず、アポトーシスの増強によりもたらされていることを確認した。4)In vivoにおけるsiRNAの効果を検討するために、EBNA-1/OriPシステムを用いてsiRNAを恒常的に発現するtransformantを作製した。これをヌードマウスの皮下に移植してコントロール群と比較した結果、著明な増殖抑制効果を認めた。

1) HIF1 α inhibits the growth of siRNA and improves the performance of vector. In the past, there was a siRNA profile in the form of a tandem. the results showed that there was a change in the shape of the stem loop. in the past, there was a change in the shape and shape of the image. Once again, HIF1 α was assigned to target. The fruit was arranged in the same way as loop. In the previous fruit, there was a vector in the suppression fruit. If you confirm that you have northern blotting and western blotting, you will not be able to do so. 2) vector cancer cell lines M1A Paca2, PK-8, PANC-1, cholangiocarcinoma cell line TFK-1, HuCCT1, and hepatoma cell line HepG2 were found in HIF1 α tumor siRNA. In general, the low-acid state of the colony formation assay is used to treat the plant outside the HepG2, the plant is low in acid, the plant is low in acid, and the degree of colonization inhibition is very low. 3) HIF1 α inhibition