胃癌微小リンパ節転移検出に用いる新規遺伝子マーカー単離に関する研究

胃癌微淋巴结转移检测新基因标记物的分离研究

• 批准号: 14770669
• 负责人: 馬渕 秀明
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770669/
• 关键词: 胃癌; 微小リンパ節転移

平成15年度の研究にinformed consentが得られた進行胃癌患者は44例であった。手術摘出標本から正常組織と腫瘍組織を採取し、RNAを抽出した。このうち肉眼的にリンパ節転移陽性と判断した2症例に対しては転移リンパ節も採取し、RNAを抽出した。この際、14年度の臨床病理学的な検討結果から、占居部位が大弯側の症例は大弯側の肉眼的転移陽性リンパ節を、その他の部位は最も近傍の転移リンパ節を採取した。平成14年度に採取した症例も加えて肉眼的リンパ節転移陽性進行胃癌症例の腫瘍組織と正常組織のmRNAを用いてPCR-Selected Subtraction Hybridizationを行った。まず、対象症例の中で特に高度にリンパ節転移を来していた症例を優先的に選択した。選択した症例のTotal RNAをmRNA purification kitを用いて可及的にpureなmRNAを抽出し、PCR-Selected Subtraction kit (Clontech)のmanualにしたがって実験を進めていった。腫瘍組織をTargetに、正常組織をDriverに設定し、それぞれから抽出したmRNAを用いて2nd stralnd cDNAを作製した。次いで両cDNAをRsa1で消化し、Target cDNAにはAdapterをligationした。これらの各工程でエタノール沈殿による精製を行っているために予想していたより多くのDNAをlossしてしまった。また、Adapterのligation効率が未だ良好といえず、Hybridization後に解析に用いるほど遺伝子の単離が行えていないのが現状である。今回申請した研究期間は本年度で終了であるが、step by stepに各工程を検証しつつ、再実験中であり、是非とも癌組織に高発現している遺伝子群を単離して臨床に役立たせたい。

A study conducted in FY2015 was conducted on 44 gastric cancer patients with informed consent. During surgery, specimens are removed, normal tissue and tumor tissue are collected, and RNA is extracted. The results of the detection of positive results with the naked eye and the extraction of RNA from the 2 cases of symptoms were determined by the naked eye. The results of clinical pathology in 2014 and the cases of symptoms occupying the greater curvature side of the greater curvature The naked eye's positive and negative parts are the most visible parts of the body. In 2009, we performed PCR-Selected Subtraction Hybridization on gastric cancer cases and normal tissue using PCR-Selected Subtraction Hybridization for gastric cancer cases.まず、対 Symptoms の中で特に高にリンパパ転动を来 していた Symptoms を The priority に选択した. Select ぞしたのTotal RNA をmRNA purification kit を use いて にpure なmRNA を extraction し, PCR-Selected Subtraction kit (Clontech)のmanualにしたがって実験を入めていった. The tumor tissue is Targeted, the normal tissue is set by Driver, and the mRNA is extracted and cDNA is produced using 2nd stralnd cDNA. Sub-cDNAをRsa1でdigestionし、Target cDNAにはAdapterをligationした.これらのeach process でエタノール戈る精品を行っているために元思していたより多くのDNAをlossしてしまった.また, Adapter's efficiency is not good, and the analysis after Hybridization is good. The research period for applying this time is the end of this year, step by StepにEach project is a proof of concept, a new diagnosis and treatment, a right and wrong cancer tissue, a high 発 appear, a group of leftovers, a clinical diagnosis and treatment, and a clinical diagnosis and treatment.